陰道上皮細胞轉染抗菌肽LL-37和防御素5后對假絲酵母菌抑制作用的研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學博士學位論文陰道上皮細胞轉染抗菌肽LL37和防御素5后對假絲酵母菌抑制作用的研究姓名：王芳申請學位級別：博士專業(yè)：臨床醫(yī)學；婦產(chǎn)科學指導教師：尹利榮201205天津醫(yī)科大學博士學位論文中聯(lián)合轉染細胞分泌LL37、HD5、IL8的水平均高于其它各亞組細胞，峰值分別為(10016081)ng／ml、(58q0’08)ng／ml和(10103159)pg／ml，差異均有統(tǒng)計學意義(尸005)，吸光度呈緩慢下降趨勢，其中聯(lián)合轉染細胞

2、6、12、24、48h的彳值分別為36100010、35900010、3560上l0010、35300010(尸005)；帶菌組中聯(lián)合轉染細胞么值6、12、24、48h分別為32100010、31500030、30990030、2970一1O040，明顯高于其他帶菌組細胞，差異有統(tǒng)計學意義(尸O01)，且下降趨勢較其他帶菌組細胞緩慢。結論：(1)成功構建了帶熒光蛋白的pcDNA3I()／LL一37EGFP和DcDNA3I()／HD5EG

3、FP的真核重組質粒；(2)采用分步酶消化法K—SMF培養(yǎng)基進行體外陰道上皮細胞原代培養(yǎng)是較佳方法，原代人陰道上皮細胞活性、存活能力、單細胞分裂增生能力較強，免疫組化角蛋白染色陽性，細胞純度達到99％，苔盼藍拒染法證實細胞活力可達95％～99％。細胞傳代后仍在一定時間內保持增殖能力，為陰道粘膜疾病的體外研究提供了實驗模型；(3)DcDNA3I()／LL37EGFP，pcDNA3I(／HD5EGFP真核重組質粒轉染陰道上皮細胞后可在上皮細胞

4、中充分、高效的表達，表達的LL37及HD5蛋白具有活性，轉染真核重組質粒后陰道上皮細胞LL37及HD5分泌量均明顯增加，假絲酵母菌生長密度及葡萄糖消耗量均減低直接增強了陰道上皮細胞抵抗假絲酵母菌的能力，且轉染兩種質粒的陰道上皮細胞抑菌率最高，兩種質粒的分泌有協(xié)調促進作用。HD5及LL37可以刺激其下游炎癥趨化因子IL8的分泌，間接增強了陰道上皮細胞對假絲酵母茵的先天免疫能力。本研究為VVC的基因治療提供了可靠的實驗參考。關鍵詞：外陰陰道