KGF對口腔黏膜上皮細胞凋亡及增殖的影響.pdf

1、目的:
　　 多種口腔黏膜病的發(fā)病與細胞凋亡密切相關;近來研究發(fā)現(xiàn)角質細胞生長因子（Keratinocytegrowthfactorreceptor，KGF）不僅能特異性的促上皮細胞增殖和分化，還抑制上皮細胞的凋亡。在課題組前期對KGF的研究發(fā)現(xiàn)在口腔扁平苔蘚中KGF、KGFR及KGFmRNA的表達均較正常黏膜低，而KGF蛋白及KGFmRNA在口腔白斑中表達較正常黏膜高，推測KGF與口腔黏膜上皮細胞的增殖和凋亡有密切的聯(lián)系。

2、r>　　 本實驗通過觀察不同濃度KGF對體外培養(yǎng)的口腔黏膜上皮細胞形態(tài)學影響，采用流式細胞儀技術檢測上皮細胞凋亡率的改變，并應用熒光實時定量技術檢測KGF對上皮細胞凋亡及增殖相關基因表達的影響，探討KGF對口腔黏膜上皮細胞增殖及凋亡的作用，為進一步探討研究KGF在口腔黏膜病發(fā)生發(fā)展中的作用提供依據，為口腔黏膜病的臨床治療提供一定的理論基礎。
　　 方法:
　　 1.體外培養(yǎng)人口腔黏膜上皮細胞，取5～10代培養(yǎng)至70～8

3、0％融合時分別加入含不同濃度KGF(0ng/ml，5ng/ml，25ng/ml，50ng/ml)的D-KFSM，將其分為對照組(KGF0ng/ml)和實驗組(KGF5ng/ml，25ng/ml，50ng/ml)，共四組，培養(yǎng)12h、24h、48h后觀察人口腔黏膜上皮細胞形態(tài)的改變;
　　 2.培養(yǎng)48h后流式細胞儀檢測各組上皮細胞的凋亡率;
　　 3.分別培養(yǎng)12h、24h、48h后用熒光實時定量檢測各組細胞內凋亡相關基

4、因Bcl-2、BaxmRNA的表達;
　　 4.分別培養(yǎng)12h、24h、48h后用熒光實時定量檢測各組細胞內增殖相關基因PCNAmRNA的表達;
　　 5.應用統(tǒng)計學方法對細胞凋亡率、Bcl-2、Bax、PCNAmRNA的表達數進行分析，得出結論。
　　 結果:
　　 1.觀察細胞形態(tài):相同時間段實驗組較對照組上皮細胞貼壁緊，遮光性明顯增強，培養(yǎng)48h后，實驗3組（KGF50ng/ml）較其他組細胞核仁明

5、顯;
　　 2.流式細胞儀檢測細胞凋亡率:不同濃度KGF培養(yǎng)48h后，隨KGF濃度增加細胞的凋亡率減低(P＜0.05);
　　 3.熒光實時定量檢測對凋亡的影響結果顯示:
　　 (1)12h時實驗1、2組較對照組上皮細胞內Bcl-2mRNA表達無顯著差異，實驗3組較對照組Bcl-2mRNA表達逐漸增加，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;
　　 (2)24h時，各實驗組較對照組Bcl-2mRNA表達均顯著增加（

6、P＜0.05），但各實驗組間無統(tǒng)計學差異，(P＞0.05);
　　 (3)48h時各實驗組較對照組Bcl-2mRNA表達均顯著增加且呈劑量依賴性，(P＜0.05);
　　 (4)12h時，實驗1、2組較對照組BaxmRNA表達無明顯差異，(P＞0.05);實驗3組較對照組BaxmRNA表達明顯降低(P＜0.05);24h和48h時，實驗組較對照組BaxmRNA表達逐漸降低，(P＜0.05);
　　 4.熒光實時定

7、量檢測對增殖的影響結果顯示:各時間段實驗組較對照組比PCNAmRNA表達均增加
　　 (1)12h時，各實驗組間PCNAmRNA表達逐漸降低，(P＜0.05);
　　 (2)24h時實驗組較對照組PCNAmRNA表達增加，(P＜0.05)，但各實驗組間無統(tǒng)計學差異，(P＞0.05);
　　 (3)48h時，實驗組較對照組PCNAmRNA表達增加，且呈劑量依賴性，(P＜0.05)。
　　 結論:
　　

8、 本研究發(fā)現(xiàn)外源性KGF能使體外培養(yǎng)的口腔黏膜上皮細胞凋亡率減低;外源性KGF可上調細胞凋亡相關基因Bcl-2mRNA的表達，下調BaxmRNA表達，并同時上調細胞增殖相關基因PCNAmRNA的表達，提示KGF通過調節(jié)細胞凋亡相關基因Bcl-2、BaxmRNA的表達抑制上皮細胞的凋亡，還能通過上調細胞增殖相關基因PCNAmRNA的表達促進上皮細胞的增殖，對上皮細胞有促進增殖和抑制凋亡的雙重作用;為進一步探討研究KGF在口腔黏膜病發(fā)生發(fā)