雪上一枝蒿生物堿提取純化工藝研究及其毒性與有效性的初步評價.pdf

1、目的:研究雪上一枝蒿生物堿提取、純化工藝條件;初步考察雪上一枝蒿的毒性和有效性。
　　方法:以雪上一枝蒿甲素（雪甲素）和雪上一枝蒿總生物堿（雪總堿）提取率為評價指標，采用正交試驗優(yōu)選雪總堿提取工藝;采用單因素法考察雪總堿的純化工藝;以急性毒性試驗和藥效試驗，尋找雪上一枝蒿不同制劑的治療窗范圍;采用大鼠心臟毒性試驗、豚鼠皮膚刺激性和過敏性試驗，初步評價雪總堿微乳、雪總堿溶液皮膚用藥的安全性。
　　結果:雪上一枝蒿提取工藝條件為

2、:水煎煮法提取3次，每次1h，每次加12倍量水;純化工藝采用001×7型陽離子交換樹脂，樹脂徑高比為1∶9，上樣藥液濃度以含生藥量計為0.25 g·mL-1，以2.0 mE· min-1流速動態(tài)上樣5BV，2.0mL·min-1流速水洗10BV，0.02 g·mL-1氯化鈉-50％乙醇作為解析液，以0.5mL·min-1流速洗脫20BV;解析液調pH值至6～7，解析液干燥物用10倍量乙醇回流提取1次，時間1h;乙醇提取干燥物用氯仿回流提

3、取2次，第一次8倍量氯仿，第二次6倍量氯仿，每次1.5h，所得純化物中雪甲素的純度為19.55％、雪總堿的純度為60.57％。經(jīng)皮給藥試驗中，雪上一枝蒿藥材醇提液、雪總堿微乳及雪總堿溶液均無中毒反應及死亡情況。雪總堿微乳、雪總堿溶液對二甲苯致小鼠耳廓腫脹具有一定的抗炎作用，其中雪總堿微乳發(fā)揮抗炎作用所需劑量減少。皮內注射給藥試驗中，雪總堿微乳、雪總堿溶液及藥材醇提液發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的治療指數(shù)TI分別為10.460、6.825、5.25，安全

4、系數(shù)SF分別為1.788、1.650、1.178;發(fā)揮抗炎作用的治療指數(shù)TI分別為4.083、2.751、3.405，安全系數(shù)SF分別為1.070、0.700、0.851。心臟毒性試驗中，雪總堿微乳與雪總堿溶液給予相同劑量時，經(jīng)皮給藥對大鼠心臟毒性與正常組無顯著性差異;皮內注射給藥，雪總堿微乳對大鼠心電圖及心功能各項指標的影響與正常組比較有顯著性差異。皮膚刺激性試驗中，雪總堿微乳、雪總堿溶液及其相應賦形劑單次給藥與多次給藥對完整皮膚及破

5、損皮膚刺激性的平均分值均小于0.49。皮膚過敏性試驗中，陽性對照組豚鼠的致敏率達到100％，雪上一枝蒿各藥物組及相應賦形劑組受試區(qū)皮膚自激發(fā)給藥6～72h均未出現(xiàn)紅斑及水腫。此外，均未出現(xiàn)哮喘、站立不穩(wěn)及休克等嚴重的全身性過敏反應。
　　結論:雪上一枝蒿生物堿提取純化工藝穩(wěn)定、可行，所制得純化物純度達到要求。雪上一枝蒿藥材醇提液、雪總堿微乳及雪總堿溶液經(jīng)皮給藥不產(chǎn)生急性毒性，且具有一定的抗炎作用。雪總堿微乳皮內注射發(fā)揮鎮(zhèn)痛、抗炎作