中碳鏈脂肪酸對(duì)人肝細(xì)胞凋亡及炎癥應(yīng)答的影響.pdf

1、中碳鏈脂肪酸（Medium chain fatty acids，MCFA）由于碳鏈短，分子小，比長(zhǎng)鏈脂肪酸（Long chain fatty acids，LCFA）更易于吸收且供能迅速，使得其被廣泛研究。但是關(guān)于MCFA干預(yù)細(xì)胞后的炎癥應(yīng)答方面的研究很少，因此本文以人肝細(xì)胞為作用對(duì)象，用不同碳鏈長(zhǎng)度的脂肪酸作用后，分析脂肪酸對(duì)人肝細(xì)胞的凋亡及炎癥應(yīng)答影響。
　　采用MTT（噻唑藍(lán)）和LDH（lactate dehydrogenas

2、e，乳酸脫氫酶）實(shí)驗(yàn)測(cè)定脂肪酸對(duì)人肝細(xì)胞和BALB/C小鼠的肝、脾細(xì)胞的增殖活性的影響，確定最適作用濃度；用倒置熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脂肪酸對(duì)細(xì)胞凋亡的影響；用SOD（superoxide dismutase，超氧化物歧化酶）和MDA（ malonaldehyde，丙二醛）實(shí)驗(yàn)來(lái)測(cè)定脂肪酸對(duì)細(xì)胞的氧化損傷；HPLC（High Performance Liquid Chromatography，高效液相色譜法）觀測(cè)脂肪酸對(duì)細(xì)胞胞內(nèi)蛋白

3、的影響；隨后采用 LPS（lipopolysaccharide，脂多糖）作用于細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照組，用 q-PCR（實(shí)時(shí)熒光定量），ELISA（酶聯(lián)免疫）和WB（Western Blotting，蛋白印跡）來(lái)分析脂肪酸作用后細(xì)胞在不同水平的經(jīng)典的炎癥因子的變化（ TNF-α、MCP-1、IL-1β、IL-8、IL-6）。
　　結(jié)果表明：200μM的脂肪酸作用肝細(xì)胞24小時(shí)后細(xì)胞依舊保持較高的細(xì)胞活力，且與空白對(duì)照組相比無(wú)顯著氧化損傷

4、，其中 L C FA引起的細(xì)胞凋亡比MCFA更為強(qiáng)烈，胞內(nèi)蛋白種類和數(shù)量也發(fā)生更大的變化；LPS有效地引起了細(xì)胞的炎癥應(yīng)激，使得細(xì)胞因子在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平都顯著高于空白對(duì)照組，而脂肪酸則無(wú)如此明顯；LCFA上調(diào)TNF-α，MCP-1，IL-1β下調(diào)IL-8，IL-6在細(xì)胞上清的分泌，且程度都大于MCFA，這一變化在mRNA水平相應(yīng)地觀察到，而蛋白水平也有所反映。上述說(shuō)明在對(duì)人肝細(xì)胞進(jìn)行相同的干預(yù)下，與LCFA相比，MCFA呈現(xiàn)出更為溫和的