游離脂肪酸對小鼠胰島β細胞株NIT-1細胞凋亡及功能的影響.pdf

1、目的:研究不同濃度的游離脂肪酸(free fatty acids,FFA)的不同作用時間對小鼠胰島β細胞株NIT-1細胞凋亡及功能產生的影響。以期進一步分析FFA水平異常介導β細胞損害的機制,為糖脂代謝紊亂患者的治療提供參考。
　　方法:以小鼠的胰島β細胞株NIT-1為研究對象,在PRMI1640培養(yǎng)液中加入含10％小牛血清、100 U/ml青霉素、100 mg/L鏈霉素,置于5%CO2、37℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。在倒置相光

2、學顯微鏡下觀察培養(yǎng)瓶中的胰島β細胞株NIT-1細胞的生長情況;繪制生長曲線,取對數(shù)期生長的細胞分為實驗組、FFA0.25mmol/l組、FFA0.5mmol/l組、FFA1.0mmol/l組。采用MTT比色法檢測不同濃度FFA及不同作用時間(24h,48h,72h)干預后各組細胞OD值,計算胰島β細胞株NIT-1細胞的增殖抑制率;采用免疫熒光染色法檢測凋亡細胞的形態(tài),應用熒光顯微鏡(Olympus,日本)觀察細胞凋亡情況;采用放射免疫分

3、析法檢測各組胰島β細胞株NIT-1細胞培養(yǎng)基中的胰島素水平,了解細胞功能。所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析。各指標以x±s表示,實驗組與對照組組間均數(shù)比較,所得結果用方差分析、兩樣本t檢驗及配對樣本t檢驗進行統(tǒng)計分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:①采用MTT法測定各組細胞OD值,與對照組比較,FFA0.25 mmol/L誘導24 h后的細胞增殖活性無明顯降低(P>0.05),0.5 mmol/L和1

4、mmol/L FFA誘導24 h后的細胞增殖活性明顯降低(P<0.05),不同濃度FFA誘導48,72h后的細胞增殖活性與對照組比較均明顯降低,細胞增殖抑制率上升。②FFA對NIT-1細胞胰島素分泌功能的影響:對照組與FFA實驗組分別培養(yǎng)24h、48h、72h收集各組細胞上清液,用放射免疫分析方法檢測各組胰島素值比較各組隨著濃度及作用時間的增加,胰島素水平隨之減少,甚至完全被抑制。③免疫熒光染色檢測凋亡細胞的形態(tài)學分析:熒光顯微鏡下可見

5、空白對照組細胞核形態(tài)為圓形或橢圓形,邊界清楚,FFA組出現(xiàn)凋亡細胞核變形,表現(xiàn)為核碎裂、固縮、核小體形成。
　　結論:①FFA干預后的βNIT-1細胞增殖抑制率隨FFA作用時間延長、濃度增加而進行性增加。FFA水平異常不利于胰島βNIT-1細胞生存。②FFA干預后的βNIT-1細胞的胰島素分泌水平隨FFA作用時間延長、濃度增加而進行性減少,FFA對于NIT-1細胞的胰島素分泌功能有明顯的時間和濃度依賴性。可誘導βNIT-1細胞凋亡

6、,降低其分泌功能。③FFA干預后的βNIT-1細胞隨著作用濃度和時間的增加凋亡細胞比例增加。因此,脂代謝異?？擅黠@損害胰島β細胞的功能,及早干預血脂水平,消除脂毒性可作為糖尿病防治中的一項重要指標。
　　意義:近年來2型糖尿病的脂毒性作用已日益受到重視。通過本實驗我們可以看出,早期降脂治療,對改善胰島β細胞功能有著非常積極的作用和意義,及早干預血脂異常促進的胰島β細胞凋亡,盡可能的保存細胞的胰島素分泌功能。糖尿病防治的長遠目標應在