多種細(xì)胞衰老標(biāo)記物在大腸腺瘤、大腸癌的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、大腸癌(colorectal carcinoma，CRC)在中國(guó)的發(fā)病率及死亡率呈逐漸上升趨勢(shì)，這嚴(yán)重威脅到人類的健康。然而，早期診斷、及時(shí)治療結(jié)直腸癌的局限性病變，其預(yù)后良好，5年生存率超過(guò)90％，但晚期已發(fā)生轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者，其5年生存率僅有11％。已公認(rèn)大腸腺瘤是癌前病變，但尚未明確大腸腺瘤轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)直腸癌的發(fā)生機(jī)制。因此，對(duì)于結(jié)直腸癌發(fā)生機(jī)制的研究，積極尋找早期診斷結(jié)直腸癌生物學(xué)標(biāo)志物，發(fā)現(xiàn)高風(fēng)險(xiǎn)癌變腺瘤，這有利于做到早期預(yù)防、

2、診斷、治療結(jié)直腸癌，從而提高生存率，降低死亡率。相關(guān)研究表明，在體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)均觀察到細(xì)胞衰老的發(fā)生是一種腫瘤抑制反應(yīng)，并在黑色素瘤、結(jié)腸腺瘤和肺腺瘤等的各種人類癌前病變中能夠發(fā)現(xiàn)一些衰老的特征。由此猜想，細(xì)胞衰老可能參與到大腸腺瘤癌變的過(guò)程，這有待進(jìn)一步研究證實(shí)。
　　目的：
　　通過(guò)檢測(cè)大腸腺瘤、大腸癌以及大腸正常粘膜組織中數(shù)個(gè)細(xì)胞衰老標(biāo)志物，以及分析其與臨床資料的關(guān)系，來(lái)探索細(xì)胞衰老是否參與到腺瘤癌變的過(guò)程，并尋找可能

3、預(yù)測(cè)結(jié)腸腺瘤癌變發(fā)生或進(jìn)展的分子標(biāo)記物，有助于早期發(fā)現(xiàn)高風(fēng)險(xiǎn)的癌前病變，旨在為結(jié)腸癌的發(fā)生機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.通過(guò)SA-β-gal染色法檢測(cè)30例大腸腺瘤、30例大腸腺瘤旁正常粘膜組織、48例大腸癌組織以及48例癌旁組織，通過(guò)SA-β-gal藍(lán)染陽(yáng)性面積比檢測(cè)衰老細(xì)胞，從而比較不同大腸組織中衰老細(xì)胞的表達(dá)，并分析SA-β-gal陽(yáng)性面積比與各個(gè)臨床指標(biāo)（病理類型、大小、部位、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等）

4、的關(guān)系。
　　2.通過(guò)免疫組化染色法檢測(cè)30例大腸腺瘤、30例大腸腺瘤旁正常粘膜組織、48例大腸癌組織以及48例癌旁組織中p16INK4A、H3K9me3的表達(dá)水平，并探究這些衰老相關(guān)蛋白與臨床資料之間的關(guān)系。
　　3.使用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，正態(tài)分布的計(jì)量資料使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，非正態(tài)分布的計(jì)量資料使用中位數(shù)（四分位間距）表示，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和百分比表示，采用配對(duì)資料t檢

5、驗(yàn)、兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)及ANOVA檢驗(yàn)、非參數(shù)Mann-Whitney檢驗(yàn)、兩個(gè)獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)等統(tǒng)計(jì)方法，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.大腸腺瘤組織中的SA-β-gal的藍(lán)染陽(yáng)性面積比明顯大于腺瘤旁正常粘膜組織及大腸癌組織(P＜0.01)，而大腸癌組織中的藍(lán)染陽(yáng)性面積比明顯小于癌旁正常粘膜組織(P＜0.01)。比較不同分組的大腸腺瘤SA-β-gal的陽(yáng)性面積比結(jié)果提示，管狀腺瘤明顯大于絨毛管狀腺瘤(P

6、＜0.01)，大?。?cm的大腸腺瘤大于大小≥1cm的大腸腺瘤(P＜0.05)，非進(jìn)展期腺瘤大于進(jìn)展期腺瘤(P＜0.05)，而不同性別、年齡、數(shù)目、位置的大腸腺瘤的陽(yáng)性面積比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);比較不同分組的大腸癌的SA-β-gal的陽(yáng)性面積比，中分化腺癌大于低分化腺癌(P＜0.01)，無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移大于有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P＜0.01)，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期均大于Ⅳ期(P＜0.01)，而不同性別、年齡、位置、浸潤(rùn)深度及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸癌的的

7、陽(yáng)性面積比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　2.大腸腺瘤組織中的p16INK4a的表達(dá)明顯高于大腸癌組織及腺瘤旁正常組織粘膜(P＜0.01)，大腸癌組織中的p16INK4a的表達(dá)明顯低于癌旁正常粘膜組織(P＜0.01)。在大腸腺瘤中，不同病理類型、性別、年齡、大小、數(shù)目及位置的p16INK4a的表達(dá)水平無(wú)差異(P＞0.05);在大腸癌中，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的p16INK4a表達(dá)高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P＜0.05)，而不同分期p16INK4

8、a的表達(dá)為Ⅰ期＞Ⅱ期＞Ⅲ期＞Ⅳ期，而不同性別、年齡、位置、浸潤(rùn)深度、有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的p16INK4a表達(dá)無(wú)差異(P＞0.05)。
　　3.H3K9me3的表達(dá)在大腸腺瘤及大腸癌中均為高表達(dá)(P＜0.01)，H3K9me3的表達(dá)與腺瘤及大腸癌的年齡、性別、部位、病理類型等均無(wú)關(guān)系(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.SA-β-gal及p16INK4a在大腸腺瘤組織的表達(dá)明顯高于大腸癌組織及大腸正常粘膜組織的表達(dá)，這兩個(gè)衰

9、老標(biāo)志物在不同大腸組織中的表達(dá)差異說(shuō)明大腸腺瘤中的衰老細(xì)胞明顯多于大腸癌中的衰老細(xì)胞，提示細(xì)胞衰老可能作為抑制途徑參與到腺瘤發(fā)生癌變的過(guò)程。
　　2.SA-β-gal在絨毛管狀腺瘤、＞1cm的腺瘤、進(jìn)展期腺瘤中低表達(dá)，在低分化腺癌、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、Ⅳ期的大腸癌中低表達(dá)，提示高風(fēng)險(xiǎn)癌變的腺瘤的衰老細(xì)胞減少，推測(cè)SA-β-gal的檢測(cè)可能作為預(yù)警高風(fēng)險(xiǎn)癌前病變的標(biāo)志物。
　　3.p16INK4a在無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ⅰ、Ⅱ期大腸癌中高表達(dá)