大腸癌組織中ERCC1、TS、EGFR表達(dá)及臨床意義.pdf

1、組織芯片是將多個細(xì)小組織片按預(yù)先設(shè)計(jì)或研究需要整齊排列于同一載體而成的組織微陣列，具有體積小、信息含量高的特點(diǎn)。適于免疫組織化學(xué)和DNA、RNA雜交，能大大提高實(shí)驗(yàn)效率，且所得結(jié)果均一可靠、可比性強(qiáng)。近年來，組織芯片技術(shù)廣泛應(yīng)用于臨床腫瘤診斷和研究領(lǐng)域。 大腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅人民健康。大腸癌治療采用手術(shù)、放化療、分子靶向治療等相結(jié)合的綜合治療，多藥耐藥(MDR)是影響化療效果的重要因素。FOLFOx方案是常用的

2、國際標(biāo)準(zhǔn)化療方案，但化療有效率僅為25％，耐藥率較高。有研究報(bào)道，西妥昔單抗(C225)聯(lián)合FOLFOX4大大提高了化療有效率并逆轉(zhuǎn)了耐藥，為大腸癌治療帶來新的希望。 胸苷酸合成酶(TS)、切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因(ERCCl)分別為標(biāo)志氟尿嘧啶(5-Fu)、奧沙利鉑(L-OHP)耐藥的指標(biāo)，表皮生長因子受體(EGFR)為C225的靶向分子，三者共同在大腸癌耐藥中的作用機(jī)制尚不清楚，相關(guān)研究較少，而三者與臨床病理特征關(guān)系的研究國內(nèi)外

3、均未見報(bào)道。且目前臨床用藥多以經(jīng)驗(yàn)為主，較有價值的耐藥和預(yù)后指標(biāo)的聯(lián)合檢測仍較少，已成為臨床工作中急待解決的問題。 本研究擬采取組織芯片技術(shù)及免疫組化SP方法，檢測大腸中的ERCCl、EGFR、TS表達(dá)，探討其與臨床病理特征的關(guān)系及意義。 材料和方法: 1、病例和標(biāo)本 收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院及遼寧省腫瘤醫(yī)院2005年4月～2006年7月間手術(shù)切除的結(jié)直腸癌組織石蠟標(biāo)本133例，患者術(shù)前均未接受放療和

4、化療。其中男76例，女57例，年齡31-81歲，平均55.4歲。病理均為腺癌。取16例正常大腸組織作為對照。 2、試劑 ERCC1鼠抗人單克隆抗體購自NeoMarkers公司，TS鼠抗人單克隆抗體及EGFR鼠抗人單克隆抗體、SP檢測試劑盒及DAB顯色液，均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。 3、方法 應(yīng)用組織芯片技術(shù)、免疫組化SP法，按照SP檢測試劑盒說明書所示步驟進(jìn)行，ERCC經(jīng)檸檬酸緩沖液(PH=6.0)

5、微波抗原修復(fù)，EGFR經(jīng)胃蛋白酶抗原修復(fù)，TS無需抗原修復(fù)。組織芯片由上海芯超生物科技有限公司制作。 4、結(jié)果判定 ERCC1以胞核及胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色，TS、EGFR以胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色，隨機(jī)選取5個高倍視野(400×)計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，陽性細(xì)胞數(shù)百分率≤10％記作陰性(一)，>10％記作陽性(+)。 5、統(tǒng)計(jì)分析方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，卡方檢驗(yàn)及Spearman秩

6、相關(guān)分析，采用雙側(cè)檢驗(yàn)，P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1、ERCC1在大腸癌及正常大腸組織中的表達(dá)ERCC1在結(jié)直腸癌中表達(dá)陽性率為71.4％，在正常大腸組織陽性率為37.5％。ERCC1在大腸癌中表達(dá)顯著高于正常大腸組織(P=0.006)。 2、TS在大腸癌及正常大腸組織中的表達(dá)TS在大腸癌中表達(dá)陽性率為58.6％，正常大腸組織不表達(dá)TS蛋白。 3、EGFR在大腸癌及正常大腸組織中的表達(dá)E

7、GFR在大腸癌中表達(dá)陽性率為59.4％，正常大腸組織亦表達(dá)EGFR，其陽性率為18.75％。EGFR在大腸癌中表達(dá)顯著高于正常大腸組織(P=0.002)。 4、ERCC1、TS、EGFR表達(dá)與患者一般狀況及大腸癌臨床病理特征的關(guān)系ERCC1在高中分化腺癌中的表達(dá)顯著高于低分化腺癌(P=0.025)，ERCC1表達(dá)與性別、年齡、浸潤深度、部位、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期無關(guān)(P>0.05)。TS及EGFR在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期為Ⅲ

8、、Ⅳ期患者中表達(dá)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期為I、Ⅱ期者(P<0.05)，與性別、年齡、部位、浸潤深度及組織分化程度無關(guān)(P>0.05)。 5、ERCC1、TS、EGFR表達(dá)的相關(guān)性ERCC1與TS表達(dá)之間存在正相關(guān)，(r=0,217，P=0.012)，TS與EGFR及ERCC1與EGFR之間無相關(guān)性(P>0.05)。 結(jié)論: 1、大腸癌組織中，ERCC1及EGFR表達(dá)較正常組織顯著升高。ERCC1表達(dá)與組織病