LPA、GLU、LTF和PLTP基因單核苷酸多態(tài)性與冠心病相關(guān)性研究.pdf

1、冠心病是危害人類健康影響壽命的重要公共衛(wèi)生問題之一。已有大量分子流行病學(xué)和遺傳學(xué)研究顯示，冠心病是一種復(fù)雜的多基因疾病，多種遺傳因素和環(huán)境因素與冠心病有關(guān)，尤其是與脂質(zhì)代謝相關(guān)的多個基因在冠心病發(fā)生發(fā)展中起重要作用。其中，從2008年至2013年，全基因組關(guān)聯(lián)性研究(genome-wide associationstudies，GWAS)報道了近200個與脂代謝相關(guān)位點，得到了豐富的研究成果。
　　本研究根據(jù)GWAS在脂代謝和冠心

2、病中的研究結(jié)果，同時結(jié)合本實驗室的前期研究工作，共篩選了脂蛋白a(Lipoprotein(a)， LPA)基因、凝集素(clusterin，GLU)基因、磷脂轉(zhuǎn)運蛋白(phospholipid transfer protein， PLTP)基因和乳鐵蛋白(lactoferrin，LTF)基因這四個候選基因進行其基因單核苷酸多態(tài)性研究。
　　目的:探討LPA、CLU、PLTP、LTF基因單核苷酸多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性及相關(guān)代謝指標(biāo)的

3、關(guān)系。
　　方法:
　　1、研究對象
　　(1)非冠心病組:選擇367名冠狀動脈造影所示所有冠狀動脈主要分支直徑狹窄均不大于25％的人群入選至非冠心病組。
　　(2)冠心病組:選擇496名冠狀動脈造影所示至少一支心外膜下冠狀動脈主要分支直徑狹窄大于75％的人群入選至冠心病組。
　　2、候選基因和SNPs位點的選擇:本文根據(jù)本實驗室前期工作的研究成果，同時結(jié)合GWAS在冠心病中的研究結(jié)果，確定LPA、CLU、

4、PLTP和LTF這四個候選基因進行單核苷酸多態(tài)性研究。SNPs位點選擇上，首先選取基因功能區(qū)可能對蛋白質(zhì)水平產(chǎn)生影響的所有SNPs位點，再綜合該位點在中國北方漢族人群中最小等位基因頻率(Minor Allele Frequency，MAF)和文獻檢索對該位點其他人群驗證結(jié)果報道等進行篩選，最終篩選出了10個有意義的SNPs位點。
　　3、SNPs位點的檢測方法:使用基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時間質(zhì)譜分析質(zhì)譜技術(shù)（matrix-as

5、sisted laser desorption/ionization-time of flight,MALDI-TOF）進行分型檢測。
　　4、統(tǒng)計分析方法:應(yīng)用SPSS20.0軟件對計數(shù)資料進行卡方檢驗，對正態(tài)分布的計量資料進行單因素方差分析，對非正態(tài)分布的計量資料進行秩和檢驗，當(dāng)P值小于0.05認(rèn)為具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果:
　　1、Hardy-Winberg平衡檢驗:9個SNPs位點符合H-W平衡。

6、>　　2、冠心病組與非冠心病組間關(guān)聯(lián)分析結(jié)果:
　　(1)組間等位基因頻率的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果:位于LPA基因上的rs3798220位點(C/T)在等位基因頻率方面具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.049)，余位點未見顯著性差異。
　　(2)組間基因型頻率的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果:9個SNPs位點均未見顯著差異(P＞0.05)。
　　(3)組間基因模型中基因型頻率的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果:顯性模型中LPA基因的rs3798220位點(CC+CT型vs

7、 TT型)具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.043)，余位點未見顯著差異。隱性模型中CLU基因上的rs3216167位點（DEL型vs A.DEL+AA型）在兩組受試者間具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異P=0.047，余位點未見顯著性差異(P＞0.05)。
　　(4)單倍體分析:rs3798220和rs1801693位點、rs3216167、rs7982、rs1532278位點之間以及rs378114和rs394643位點之間為連鎖不平衡區(qū)域，各

8、連鎖不平衡區(qū)域均與冠心病不相關(guān)。
　　3、不同基因型間計量指標(biāo)的比較:
　　(1) LPA基因:rs3798220位點中血清LPA具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.001);rs1801693位點中未見有顯著性差異的血清代謝指標(biāo);rs7765803位點中血清LPA具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P=0);
　　(2) CLU基因:rs3216167位點中血清LPA和HbA1c具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P值分別為0.032，0.029）;

9、rs7982位點中血清TC、LDL具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P值分別為0.069，0.051）;rs1532278位點中血清TC水平、LDL、APOB具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（P值分別為0.048，0.039和0.052）;
　　(3) LTF基因:rs1126477位點血清TG具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.011);
　　(4) PLTP基因:rs378114位點中未見有顯著差異的血清代謝指標(biāo);rs394643位點中血清APOB具

10、有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.011)。
　　4、SNP位點等位基因變化引起冠心病風(fēng)險變化程度
　　rs3798220位點中，CT+CC型發(fā)生冠心病的風(fēng)險比TT增加了1.5倍。該位點能夠解釋0.7％的冠心病病因(Nagelkerke R2=0.07)。
　　5、血LPA和冠心病關(guān)系的關(guān)聯(lián)指標(biāo)
　　根據(jù)rs3798220基因型分組，比較基因型-疾病，基因型-血清LPA水平，推導(dǎo)出血清LPA水平和冠心病關(guān)系的關(guān)聯(lián)指標(biāo)O

11、RLPA-CAD=1.503K.14.64，即血清LPA變化K個單位時發(fā)生冠心病的效應(yīng)值。
　　結(jié)論:
　　1、LPA基因:rs3798220位點可能通過影響血清LPA水平影響冠心病發(fā)生;rs7765803位點可能影響血LPA水平；
　　2、CLU基因:rs3216167位點可能影響血清LPA水平，并與冠心病發(fā)生相關(guān);rs7982位點可能影響血TC、LDL水平;rs1532278位點可能影響血TC、LDL、APOB水平