ERK1-2通路參與mmLDL上調(diào)小鼠腸系膜動(dòng)脈α1受體.pdf

1、研究背景與目的:弱氧化型低密度脂蛋白(minimally modified low density lipoprotein，mmLDL)是指僅脂質(zhì)部分被氧化，載脂蛋白B100結(jié)構(gòu)中賴氨酸殘基未被破壞的LDL，可以被LDL受體識(shí)別，可以被進(jìn)一步氧化成oxLDL。有研究發(fā)現(xiàn)在離體器官和細(xì)胞培養(yǎng)中，mmLDL可以顯著上調(diào)心腦血管平滑肌內(nèi)皮素B受體，增強(qiáng)血管的收縮功能；mmLDL還能與巨噬細(xì)胞上的TLR4結(jié)合，啟動(dòng)免疫反應(yīng)誘發(fā)大量炎癥因子的產(chǎn)生

2、，還誘導(dǎo)細(xì)胞吞噬功能改變，加速泡沫細(xì)胞的形成。前期研究發(fā)現(xiàn)，mmLDL顯著降低血管內(nèi)皮依賴性舒張功能，主要通過(guò)上調(diào)TLR4的蛋白表達(dá)量，誘發(fā)炎癥反應(yīng)，損傷內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。本實(shí)驗(yàn)將觀察mmLDL對(duì)腸系膜動(dòng)脈α1受體的作用及機(jī)制。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)設(shè)立三組模型進(jìn)行，分為尾靜脈注射生理鹽水組（NS)，尾靜脈注射 mmLD組（mmLDL），尾靜脈注射 mmLDL同時(shí)腹腔注射 U0126組（mmLDL+U0126）。U0126為ERK1/

3、2通道特異性抑制劑，在尾靜脈注射mmLDL前2h腹腔注射。藥物注射時(shí)間為96 h，注射完成后將小鼠脫臼處死，取小鼠腸系膜動(dòng)脈，使用微血管肌張力描記儀測(cè)量去甲腎上腺素(Noradrenaline，NA)在小鼠腸系膜動(dòng)脈引起的血管張力，Elisa試劑盒檢測(cè)小鼠體內(nèi)oxLDL，TNF-α和IL-1β血清濃度，實(shí)時(shí)定量PCR、Western Blotting分別檢測(cè)α1受體、α2受體、TNF-α、IL-1β和pERK1/2的表達(dá)。
　　結(jié)

4、果：U0126顯著抑制mmLDL增強(qiáng)α受體介導(dǎo)的收縮功能，使Emax值由mmLDL組的(161±11)％降低為(130±11)%(P<0.01)，pEC50由mmLDL組的6.20±0.07降低為5.75±0.14(P<0.05)。使用選擇性α1受體拮抗劑哌唑嗪(10-11～10-9M)使NA量效曲線平行右移不伴有Emax值的顯著改變，pA2值為10.91±0.28。選擇性α2受體拮抗劑育亨賓(10-7～10-5 M)使 NA量效曲線平

5、行右移不伴有Emax值的顯著改變，pA2值為7.28±0.24。mmLDL引起α1受體表達(dá)增加，腹腔注射 U0126明顯抑制了mmLDL的這個(gè)作用。腹腔注射 U0126后，α1受體mRNA水平由mmLDL組的8.21±0.56降低為1.24±0.07(P<0.001)；α1受體蛋白水平由mmLDL組的1.31±0.03降低為0.93±0.05(P<0.01)，mmLDL對(duì)α2受體表達(dá)基本無(wú)顯著影響，使用 U0126后，α2受體表達(dá)也幾乎

6、沒(méi)有發(fā)生變化。腹腔注射U0126，α2受體mRNA水平由mmLDL組的0.89±0.02略升高為0.99±0.05(P>0.05)；α2受體蛋白水平由mmLDL組的0.78±0.02略升高為0.81±0.02(P>0.05)；mmLDL同時(shí)還增加了腸系膜動(dòng)脈ERK1/2蛋白磷酸化水平，pERK1/2與ERK1/2蛋白條帶灰度比值由對(duì)照組的0.50±0.01升高為0.83±0.01(P<0.01)；腹腔注射U0126能明顯抑制ERK1/2

7、的磷酸化，灰度比值由mmLDL組的0.83±0.01降低為0.49±0.01(P<0.01)；與對(duì)照組相比，mmLDL能明顯升高血清中IL-1β（30.0±3.0 pg/mL升高為67.2±4.5 pg/mL P<0.01)和TNF-α（117.4±2.7 pg/mL升高為264.8±4.6 pg/mL P<0.01)濃度；U0126能明顯抑制IL-1β和TNF-α的表達(dá)，IL-1β由mmLDL組的67.2±4.5 pg/mL降低為42

8、.9±1.8 pg/mL(P<0.01)，TNF-α由mmLDL組264.8±4.6 pg/mL降低為175.4±2.8 pg/mL(P<0.01)；同時(shí)腸系膜動(dòng)脈IL-1β的mRNA水平由對(duì)照組1.01±0.04升高為3.27±0.01(P<0.01)，腹腔注射U0126后，使IL-1β的mRNA水平由mmLDL組的3.27±0.01降低為1.35±0.02(P<0.01)，TNF-α的mRNA水平由對(duì)照組0.99±0.01升高為6.

9、80±0.21(P<0.001)，TNF-α的蛋白表達(dá)由對(duì)照組0.39±0.01升高為0.59±0.01(P<0.01)；腹腔注射U0126后使TNF-α的mRNA水平由mmLDL組6.80±0.21降低為1.60±0.07，蛋白表達(dá)由mmLDL組0.59±0.01降低為0.40±0.01；血清IL-1β、TNF-α水平與去甲腎上腺素(NA)引起的最大作用(Emax)呈現(xiàn)正相關(guān)。
　　結(jié)論：mmLDL激活ERK1/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路引