mmLDL損傷小鼠腸系膜動脈內(nèi)皮依賴性舒張功能作用及機(jī)制.pdf

1、目的:弱氧化型低密度脂蛋白（minimally modified low density lipoprotein，mmLDL）是指僅脂質(zhì)部分被氧化，載脂蛋白B100結(jié)構(gòu)中賴氨酸殘基未被破壞的LDL。離體器官和細(xì)胞培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn)，mmLDL可以顯著上調(diào)心腦血管平滑肌內(nèi)皮素B受體，增強(qiáng)血管的收縮功能；mmLDL還能與巨噬細(xì)胞上的TLR4結(jié)合，啟動免疫反應(yīng)誘發(fā)大量炎癥因子的產(chǎn)生，還誘導(dǎo)細(xì)胞吞噬功能改變，加速泡沫細(xì)胞的形成。但是，mmLDL是否對

2、整體動物血管舒張功能產(chǎn)生影響還不清楚。
　　本實驗將探討mmLDL對阻力血管腸系膜動脈內(nèi)皮依賴性舒張功能的影響及其作用機(jī)制。為抗心腦血管疾病的研究提供一定的理論指導(dǎo)和實驗基礎(chǔ)，并為心腦血管疾病的防治提供新的思路和新的藥物治療靶點。
　　方法:
　?。?）小鼠腸系膜動脈 mmLDL損傷模型建立：1mg/kg的劑量尾靜脈注射mmLDL，從第1次注射后開始計時，之后每隔12h再注射1次，第六次注射后（即在0、12、24、36

3、、48及60 h各注射1次），將小鼠脫臼處死，取出含腸系膜動脈組織，顯微鏡下剝離血管。
　?。?）運用微血管張力描記儀測定mmLDL對小鼠腸系膜動脈收縮功能與舒張功能的影響。
　　（3）運用ELISA技術(shù)檢測血漿中炎癥因子IL-1β、TNF-α的濃度水平。
　?。?）透射電鏡觀察血管內(nèi)皮超微結(jié)構(gòu)。
　?。?）RT-PCR技術(shù)檢測腸系膜動脈中IL-1β、TNF-α、KCa2.3、KCa3.1、maxi KCa的mR

4、NA表達(dá)水平。
　　（6）采用Western Blot技術(shù)檢測腸系膜動脈中TLR4、TNF-α、KCa2.3、KCa3.1、maxi KCa的蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　?。?）尾靜脈注射mmLDL能時間和劑量依賴性的損傷小鼠腸系膜動脈內(nèi)皮依賴性舒張功能，并且在1mg/kg的注射劑量和72小時作用達(dá)到最大。
　?。?）與生理鹽水組pIC506.42±0.03和 Rmax(63±5)％相比，mmLDL顯著損傷EDH

5、F-通路介導(dǎo)的血管內(nèi)皮依賴性舒張功能[pIC505.67±0.07和 Rmax(31±3)%，P<0.001，P<0.001]；與生理鹽水組pIC505.87±0.10和 Rmax(47±4)%相比，mmLDL顯著損傷NO-通路介導(dǎo)的血管內(nèi)皮依賴性舒張功能[pIC505.44±0.12和 Rmax(31±4)%，P<0.01，P<0.01]；而對 PGI2-通路的損傷無顯著影響。
　　（3）與生理鹽水組 pIC506.44±0.1

6、1和 Rmax(40±4)%相比，mmLDL顯著損傷 KCa2.3-通路介導(dǎo)的血管內(nèi)皮依賴性舒張功能[pIC505.30±0.13和Rmax(18±3)%，P<0.001，P<0.01]；與生理鹽水組pIC505.44±0.18和 Rmax(21±4)%相比，mmLDL顯著損傷 KCa3.1-通路介導(dǎo)的血管內(nèi)皮依賴性舒張功能[pIC504.72±0.13和Rmax(8±2)%，P<0.01，P<0.01]；而對maxi KCa-通路的損

7、傷基本無顯著影響。
　?。?）mmLDL在局部區(qū)域損傷內(nèi)彈力膜，并且誘發(fā)腸系膜動脈內(nèi)皮細(xì)胞剝落和水腫，導(dǎo)致了其對血管內(nèi)皮依賴性舒張功能的損傷。
　?。?）mmLDL還誘導(dǎo)血管組織中 TLR4蛋白表達(dá)明顯上調(diào)（P<0.01）。
　　（6）與生理鹽水組140.15±22.68pg/mL相比，mmLDL顯著上調(diào)血清中 TNF-α的血清濃度水平（328.95±28.85，P<0.001）；與生理鹽水組60.73±9.73pg/

8、mL相比，mmLDL顯著上調(diào)血清中IL-1β的血清濃度水平（132.75±13.37，P<0.01）；IL-1β和TNF-α的mRNA水平與血清濃度水平趨勢基本一致。
　　結(jié)論: mmLDL顯著降低血管內(nèi)皮依賴性舒張功能，其機(jī)制與下列因素有關(guān)：
　?。?）通過上調(diào)TLR4的蛋白表達(dá)量，誘發(fā)炎癥反應(yīng)，損傷內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。
　　（2）抑制NO和EDHF信號通路。
　?。?）下調(diào)KCa2.3-通道和KCa3.1-通道