雞a干擾素成熟蛋白基因的表達(dá).pdf

1、干擾素(簡(jiǎn)稱(chēng)IFN)是一種具有抗病毒、調(diào)節(jié)免疫、抑制細(xì)胞分裂和促進(jìn)細(xì)胞凋亡等多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子。信號(hào)肽是指在新合成的多肽鏈中指導(dǎo)蛋白質(zhì)跨膜運(yùn)輸?shù)陌被釟埢溟L(zhǎng)度絕大多數(shù)是20～30個(gè)氨基酸殘基，以含疏水氨基酸為主，位于“N”端。信號(hào)肽對(duì)蛋白質(zhì)的定位有著非常重要的作用，尤其是適當(dāng)改造信號(hào)肽結(jié)構(gòu)可以提高外源蛋白的分泌效率。多數(shù)外源基因在大腸桿菌宿主中過(guò)量表達(dá)時(shí)，常常導(dǎo)致表達(dá)產(chǎn)物在胞內(nèi)形成不溶性的聚集體，即形成包涵體。包涵體表達(dá)具有表

2、達(dá)量大的優(yōu)點(diǎn)，但其中的重組蛋白缺乏生物學(xué)活性，需要進(jìn)行變性和復(fù)性才能恢復(fù)其活性。因此，改造包涵體重組表達(dá)質(zhì)粒，向其中加一段L-天(門(mén))冬酰胺酶Ⅱ(ASP)信號(hào)肽，用以提高外源蛋白的分泌效率，這種方法對(duì)真核分泌蛋白尤為有效。
　　 本研究設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，從雞肝臟中擴(kuò)增出編碼α干擾素的成熟蛋白基因(ChIFN-α)；將擴(kuò)增得到的雞α干擾素的成熟蛋白基因與原核表達(dá)載體pET-28a(+)融合，構(gòu)建成原核重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a/

3、ChIFN-α，并對(duì)其誘導(dǎo)表達(dá)，考察編碼雞α干擾素的成熟蛋白基因的表達(dá)效果；在此工作的基礎(chǔ)上，通過(guò)設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，從大腸桿菌中擴(kuò)增出編碼ASP信號(hào)肽的基因片段，將ASP信號(hào)肽基因插入到pET-28a/ChIFN-α質(zhì)粒中構(gòu)建成分泌型原核重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a/ChIFN-α-ASP，并對(duì)其進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，考察ASP信號(hào)肽在重組表達(dá)質(zhì)粒中的分泌表達(dá)作用和編碼雞α干擾素的成熟蛋白基因的表達(dá)效果。
　　 研究結(jié)果表明，已構(gòu)建的兩