EGFR激活在脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、本文主要從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 脂多糖誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷模型的建立及EGFR、磷酸化EGFR在肺組織中的表達(dá)
　　目的：建立脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷（ALI）模型，并檢測(cè)肺組織中表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）、磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體（p-EGFR）的表達(dá)。
　　方法：選擇6-8周，體重18-22克的C57BL/6雄性小鼠作為研究對(duì)象，實(shí)驗(yàn)組（n=6）使用氣管內(nèi)滴注法給予LPS（2mg/kg）誘導(dǎo)

2、小鼠ALI模型，對(duì)照組（n=6）使用同等劑量的生理鹽水氣管內(nèi)滴注，24h后收集肺組織和肺泡灌洗液（BALF），肺組織切片Hematoxylin-eosin(HE）染色評(píng)估急性肺損傷程度，石蠟切片免疫熒光染色評(píng)估EGFR、p-EGFR表達(dá)水平，Western Blot檢測(cè)EGFR、p-EGFR蛋白質(zhì)表達(dá)水平。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組小鼠HE染色可見LPS誘導(dǎo)小鼠組有明顯的急性肺損傷表現(xiàn)，對(duì)照組未見明顯損傷；免疫熒光染色可見LPS誘導(dǎo)的AL

3、I組EGFR陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)量未見明顯變化，但p-EGFR陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)量明顯增加（p<0.05），而對(duì)照組p-EGFR與EGFR陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量未見明顯差異（p>0.05）；Western Blot結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組均可見EGFR表達(dá)，兩組表達(dá)水平無明顯差異，但LPS誘導(dǎo)的ALI組p-EGFR蛋白質(zhì)表達(dá)水平明顯增加（p<0.05)。
　　結(jié)論：在LPS誘導(dǎo)的小鼠ALI模型中，肺組織損傷嚴(yán)重，并且p-EGFR蛋白表達(dá)水平明顯增強(qiáng)。

4、r>　　第二部分 EGFR抑制劑Erlotinib在脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型中的作用
　　目的：檢測(cè)EGFR抑制劑Erlotinib在LPS誘導(dǎo)的小鼠ALI模型中的影響。
　　方法：選擇6-8周，體重18-22克的C57BL/6雄性小鼠作為研究對(duì)象，隨機(jī)分為6組，每組6只?？瞻讓?duì)照組（Control）小鼠不予以任何處理；陽(yáng)性對(duì)照組小鼠采用100mg/kg劑量的erlotinib灌胃（ER）；實(shí)驗(yàn)組小鼠采用2mg/kg的

5、LPS氣管內(nèi)滴注（LPS）；藥物處理組小鼠分為三組，依次為：10mg/kg erlotinib劑量灌胃、1小時(shí)后采用2mg/kg的LPS氣管內(nèi)滴注（ER10+LPS），25mg/kg erlotinib劑量灌胃、1小時(shí)后采用2mg/kg的LPS氣管內(nèi)滴注（ER25+LPS），100mg/kg erlotinib劑量灌胃、1小時(shí)后采用2mg/kg的LPS氣管內(nèi)滴注（ER100+LPS）。所有組小鼠均在LPS處理24小時(shí)后收集肺組織和肺泡灌

6、洗液（BALF），肺組織切片HE染色評(píng)估急性肺損傷程度并進(jìn)行肺組織損傷評(píng)分（Lung injury scoring system，LISS）評(píng)估，石蠟切片免疫熒光染色觀察Gr-1陽(yáng)性的中性粒細(xì)胞數(shù)量，顯微鏡下計(jì)數(shù)BALF中總細(xì)胞數(shù)量，BCA法評(píng)估BALF中總蛋白質(zhì)水平，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)BALF中IL-1β表達(dá)水平。
　　結(jié)果：肺組織損傷評(píng)分表明，與空白對(duì)照組及陽(yáng)性對(duì)照組相比，LPS誘導(dǎo)的ALI中LISS評(píng)分明顯升

7、高（p<0.05），而使用erlotinib處理組后，LISS評(píng)分下降（p<0.05），并且呈現(xiàn)erlotinib劑量依耐性。Gr-1免疫熒光表明LPS誘導(dǎo)ALI組有明顯中性粒細(xì)胞聚集（p<0.05），erlotinib處理后Gr-1陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)量減少（p<0.05）?？偧?xì)胞計(jì)數(shù)顯示，LPS誘導(dǎo)ALI組BALF中細(xì)胞數(shù)量明顯增多（p<0.05），erlotinib處理后細(xì)胞數(shù)量減少（p<0.05）。BCA法評(píng)估BALF總蛋白含量表明，e

8、rlotinib能夠抑制LPS誘導(dǎo)的ALI中總蛋白的滲出水平（p<0.05）。ELISA檢測(cè)BALF中IL-1β發(fā)現(xiàn)，使用erlotinib處理后IL-1β分泌水平均有下降（p<0.05）。
　　結(jié)論：Erlotinib能夠減緩LPS誘導(dǎo)的肺組織損傷程度，減少肺組織中中性粒細(xì)胞募集及肺組織蛋白和細(xì)胞的滲出，并能抑制炎癥因子IL-1β的分泌。
　　第三部分 EGFR抑制劑Erlotinib減輕脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷的作用機(jī)

9、制研究
　　目的：探究Erlotinib在減輕脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷中的作用機(jī)制。
　　方法：選擇6-8周，體重18-22克的C57BL/6雄性小鼠作為研究對(duì)象，隨機(jī)分為6組，每組6只?？瞻讓?duì)照組（Control）小鼠不予以任何處理；陽(yáng)性對(duì)照組小鼠采用100mg/kg劑量的erlotinib灌胃（ER）；實(shí)驗(yàn)組小鼠采用2mg/kg的LPS氣管內(nèi)滴注（LPS）；藥物處理組小鼠分為三組，依次為：10mg/kg erlotin

10、ib劑量灌胃、1小時(shí)后采用2mg/kg的LPS氣管內(nèi)滴注（ER10+LPS），25mg/kg erlotinib劑量灌胃、1小時(shí)后采用2mg/kg的LPS氣管內(nèi)滴注（ER25+LPS），100mg/kg erlotinib劑量灌胃、1小時(shí)后采用2mg/kg的LPS氣管內(nèi)滴注（ER100+LPS）。所有組小鼠均在LPS處理24小時(shí)后收集肺組織，Western Blot檢測(cè)肺組織中Toll-樣受體4（TLR4）、p65、p-p65、IL-1

11、β、TNF-α，及EGFR、p-EGFR、ERK、p-ERK、AKT、p-AKT蛋白質(zhì)表達(dá)水平。
　　結(jié)果：與空白對(duì)照組及陽(yáng)性對(duì)照組相比，LPS誘導(dǎo)的ALI組中，p-p65、p-EGFR、p-ERK、p-AKT表達(dá)水平明顯升高（p<0.05）；在使用erlotinib灌胃處理后，p-p65、p-EGFR、p-ERK、p-AKT表達(dá)水平較LPS誘導(dǎo)的ALI組明顯降低（p<0.05）。而TLR4、EGFR、ERK、AKT表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)