茶堿通過抑制NF-κB活性而減輕過氧化氫暴露下骨骼肌細(xì)胞的炎癥.pdf

1、目的：觀察茶堿對過氧化氫暴露下C2C12小鼠成肌細(xì)胞（C2C12細(xì)胞）炎癥的抑制作用。
　　方法：⑴觀察不同濃度過氧化氫（H202）和茶堿對細(xì)胞生長的影響:以C2C12細(xì)胞為研究對象，細(xì)胞分化成熟后使用終濃度分別為0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.3mmol/L、0.4mmol/L、0.6mmol/L和0.8mmol/L的H202，和終濃度分別為1mol/L、0.1mol/L、0.01 mol/L、0.001 mol/L

2、和0.0001 mol/L的茶堿干預(yù)細(xì)胞24h，進(jìn)一步采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法確定對C2C12細(xì)胞的合適藥物濃度。⑵觀察茶堿是否能下調(diào)過氧化氫暴露下C2C12細(xì)胞內(nèi)核因子-κB(NF-κB)的表達(dá)和炎癥介質(zhì)釋放：將分化好的細(xì)胞分為空白對照組、過氧化氫組(過氧化氫干預(yù)細(xì)胞24小時)、茶堿組(茶堿干預(yù)細(xì)胞24小時)、過氧化氫+茶堿組(過氧化氫和茶堿共同干預(yù)細(xì)胞24小時)、吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）+過氧化氫組。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

3、(ELISA)檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清白細(xì)胞介素-8(IL-8)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量，實(shí)時熒光定量聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測細(xì)胞內(nèi)NF-κB mRNA相對表達(dá)量的情況，蛋白印跡實(shí)驗(yàn)（Western blot）檢測細(xì)胞內(nèi)NF-κB蛋白的表達(dá)情況，凝膠遷移實(shí)驗(yàn)（EMSA）檢測細(xì)胞核內(nèi)NF-κB活性。數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：①選擇濃度為0.4％的過氧化氫和0.001 mol/L的茶堿對C2

4、C12細(xì)胞生長無明顯影響。②茶堿對炎癥因子（IL-8、TNF-α）的影響:過氧化氫組細(xì)胞上清液炎癥因子（IL-8、TNF-α）含量明顯高于空白對照組及茶堿組（P<0.05），茶堿+過氧化氫組IL-8、TNF-α較過氧化氫組減少(P<0.05)；PDTC+過氧化氫組炎癥因子（IL-8、TNF-α）明顯低于過氧化氫組(P<0.05)。③茶堿對NF-κB的mRNA相對表達(dá)量的影響：過氧化氫組NF-κB的mRNA相對表達(dá)量明顯高于空白對照組及茶

5、堿組（P<0.05），茶堿+過氧化氫組NF-κB的mRNA相對表達(dá)量較過氧化氫組減少(P<0.05)；PDTC+過氧化氫組NF-κB的mRNA相對表達(dá)量明顯低于過氧化氫組(P<0.05)。④茶堿對NF-κB蛋白表達(dá)量的影響：過氧化氫組NF-κB蛋白表達(dá)量明顯高于空白對照組及茶堿組（P<0.05），茶堿+過氧化氫組NF-κB蛋白表達(dá)量較過氧化氫組減少(P<0.05)；PDTC+過氧化氫組NF-κB蛋白表達(dá)量明顯低于過氧化氫組(P<0.05

6、)。⑤茶堿對NF-κB細(xì)胞核內(nèi)活性的影響：過氧化氫組NF-κB細(xì)胞核內(nèi)活性明顯高于空白對照組及茶堿組（P<0.05），茶堿+過氧化氫組NF-κB細(xì)胞核內(nèi)活性較過氧化氫組減少(P<0.05)，較PDTC+過氧化氫組升高(P<0.05)；PDTC+過氧化氫組NF-κB細(xì)胞核內(nèi)活性明顯低于過氧化氫組(P<0.05)。
　　結(jié)論：茶堿可以下調(diào)過氧化氫暴露下C2C12小鼠成肌細(xì)胞內(nèi)NF-κB的活性，減少IL-8和TNF-α的釋放，抑制骨骼肌