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1、登革病毒是一種能引起人類登革熱,出血性登革熱和登革休克綜合征的黃病毒,其在世界范圍內(nèi)已造成了很大的危害,引起了全球的擔(dān)憂和恐慌。
登革病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS3是一種多功能蛋白,其N(xiāo)端具有Ser蛋白酶活性, C端具有NTR磷酸酶及RNA解旋酶的活性,在病毒RNA的復(fù)制和病毒前體的加工過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。NS2B作為其輔助因子,通過(guò)與NS3形成異源二聚體復(fù)合物來(lái)激活其蛋白酶活性,并水解切割其他結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白。若能抑制 NS3
2、的活性,就能干擾病毒的復(fù)制和成熟,從而實(shí)現(xiàn)抗病毒的作用。因此,登革熱病毒絲氨酸蛋白酶NS3已成為抗病毒藥物的重要靶標(biāo)。
本研究以絲氨酸蛋白酶NS3作為分子靶標(biāo),從分子克隆構(gòu)建重組質(zhì)粒開(kāi)始,利用大腸桿菌E.coli BL21(DE3)獲得表達(dá)量較高的蛋白酶NS2B-NS3;并利用金屬離子親和層析,離子交換層析,分子排阻色譜等方法進(jìn)行分離純化,獲得較高純度的蛋白;而后采用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)測(cè)定其活性,并建立了穩(wěn)定的酶活體系(Z-
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