基于miR-146a、miR-155調(diào)控NF-κB信號通路探討芍藥甘草湯治療頸型頸椎病兔頸肌炎癥損傷的作用機制.pdf

1、目的:
　　通過探討芍藥甘草湯對頸型頸椎病模型兔頸部肌肉組織形態(tài)學(xué)的改變情況、血清炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6表達水平的改變情況，以及頸部肌肉組織中miR-146a/-155-NF-kB信號通路相關(guān)因子表達的影響，揭示芍藥甘草湯治療頸型頸椎病的可能作用機制。
　　方法:
　　30只6月齡新西蘭大白兔隨機分為高劑量芍藥甘草湯組、中劑量芍藥甘草湯組、低劑量芍藥甘草湯組、模型組和正常組，共5組，每組均6只兔子。除

2、正常組外，其余4組均參照張欣等無創(chuàng)兔頸型頸椎病動物模型的建模方法進行改良造模，8周后分別對5組兔進行相應(yīng)的干預(yù)。高、中、低劑量組兔分別給予相應(yīng)的高、中、低劑量芍藥甘草湯進行灌胃治療，每只兔每次的灌胃劑量是80ml，每日早、晚各灌胃1次;模型組、正常組不予任何干預(yù)措施，正常飼養(yǎng)。連續(xù)干預(yù)4周，結(jié)束后第二天，對五組兔均進行耳緣靜脈采血，離心后取血液上清，備用于ELISA檢測血清炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表達水平。采血后處死各

3、組兔子，取其頸后肌組織進行各項指標(biāo)的檢測:頸后肌組織HE染色后形態(tài)學(xué)觀察和比較;Western blotting檢測標(biāo)本中信號通路關(guān)鍵節(jié)點MyD88、NF-kB P65的蛋白表達量;RT-qPCR檢測標(biāo)本中TLR4、TRAF-6、miR-146a、miR-155的表達。
　　結(jié)果:
　　1.頸后肌組織大體肉眼觀:與正常組比較，模型組和高、中、低劑量組均出現(xiàn)了不同程度的炎癥損傷表現(xiàn)，且模型組損傷程度比高、中、低劑量組重。說明芍

4、藥甘草湯治療頸型頸椎病是有效的。
　　2.形態(tài)學(xué)比較，頸后肌組織退變程度由輕至重依次是正常組、高劑量組、中劑量組、低劑量組、模型組。說明芍藥甘草湯干預(yù)可以減輕頸后肌組織炎癥損傷程度，且呈劑量依賴性。
　　3.血清炎癥因子IL-6、IL-1β、TNF-α表達水平比較:干預(yù)前，模型組、高、中、低劑量組與正常組相比，各組間對照均具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，而模型組、高、中、低劑量組之間進行比較均無差異性(P＞0.05)，

5、說明本次實驗造模成功;干預(yù)后，高、中、低劑量組的表達水平均明顯下降，且模型組與正常組相比有顯著差異性(P＜0.01)，模型組、高、中、低劑量組之間相比較，各組間對照均具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，說明芍藥甘草湯可以降低血清炎癥因子IL-6、IL-1β、TNF-α的表達水平，且呈劑量依賴性。
　　4.頸后肌組織中MyD88、NF-kB P65蛋白表達比較:干預(yù)后，低、中、高劑量組的表達均降低，且模型組與正常組相比具有顯著性統(tǒng)

6、計學(xué)意義(P＜0.01)，模型組、低、中、高劑量組之間相比，各組間對照也均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。說明芍藥甘草湯可以降低頸后肌組織中MyD88、NF-kB P65的蛋白表達，且呈劑量依賴性。
　　5.頸后肌標(biāo)本中miR-146a、miR-155、TLR4、TRAF-6表達水平比較:干預(yù)后，低、中、高劑量組miR-146a的表達水平均升高，miR-155、TLR4、TRAF-6的表達水平均降低，且模型組與正常組相比有顯著性統(tǒng)

7、計學(xué)意義(P＜0.01)，模型組、低、中、高劑量組之間進行比較，各組間對照也均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。說明芍藥甘草湯可以降低頸后肌組織中miR-155、TLR4、TRAF-6的表達，升高miR-146a的表達，且均呈劑量依賴性。
　　結(jié)論:
　　1.高、中、低這三種不同劑量的芍藥甘草湯治療方法均對緩解兔頸型頸椎病的炎癥損傷有效，且其效果呈劑量依賴性:高劑量組＞中劑量組＞低劑量組＞模型組。
　　2.芍藥甘草湯治療