母體孕期鎘暴露誘發(fā)胎兒神經(jīng)管畸形和生長(zhǎng)受限的機(jī)制.pdf

1、目的：此前的研究發(fā)現(xiàn)孕鼠在孕期GD9暴露鎘可致胎鼠前肢缺趾畸形和尾部畸形，本次實(shí)驗(yàn)研究在胎兒神經(jīng)管形成期對(duì)孕鼠進(jìn)行鎘暴露是否會(huì)導(dǎo)致胎鼠神經(jīng)管畸形并初步探討其部分機(jī)制。
　　方法：本次實(shí)驗(yàn)主要包括以下三個(gè)實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)一：鎘致胎鼠神經(jīng)管畸形模型：36只 ICR小鼠在受孕第8（GD8）天按體重隨機(jī)平均分為三組，于 GD8天8:00 a.m-9:00a.m通過腹腔注射分別給予0、2.5、5mg/kg的CdCl2。受孕期間三天稱量一次孕鼠體重

2、，每天記錄孕鼠飲食飲水量。GD18天進(jìn)行取材，摘眼球法收集孕鼠血液，頸椎脫臼法處死并剖殺所有孕鼠，記錄活胎數(shù)、死胎數(shù)、畸形胎鼠數(shù)和吸收胎數(shù)，稱量活胎體重和胎盤重量，留取胎盤作病理切片觀察HE染色。
　　實(shí)驗(yàn)二：研究孕鼠鎘暴露后對(duì)葉酸轉(zhuǎn)運(yùn)的影響：24只ICR小鼠按體重在受孕第8（GD8）天按體重隨機(jī)分為兩組（對(duì)照組與鎘處理組），鎘處理組于GD8天8:00 a.m-9:00a.m單次腹腔注射5mg/kg的CdCl2，對(duì)照組給予生理鹽水

3、處理。24h后剖殺孕鼠，摘眼球法收集孕鼠血液，取胚胎和胎盤。血液室溫靜置2h左右3000轉(zhuǎn)離心10min留血清和胚胎一起-80℃保存用于檢測(cè)葉酸含量。
　　實(shí)驗(yàn)三：研究孕鼠鎘暴露后對(duì)胎盤葉酸轉(zhuǎn)運(yùn)泵的影響:48只ICR小鼠按體重在受孕第8（GD8）天按體重隨機(jī)分為8組。其中，鎘處理組于 GD8天8:00a.m-9:00a.m單次腹腔注射5mg/kg的CdCl2，對(duì)照組給予生理鹽水處理。鎘處理組孕鼠于鎘處理后不同時(shí)間點(diǎn)剖殺（2h、12

4、h、24h、48h、72h），對(duì)照組于0h、24h、48h、72h進(jìn)行剖殺。摘眼球法收集孕鼠血液，取胎盤做RT-PCR和Western Blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胎盤葉酸轉(zhuǎn)運(yùn)泵水平。
　　結(jié)果：孕鼠孕期第8天暴露鎘可致胎鼠神經(jīng)管畸形。其中2.5mg/kg鎘處理組的窩神經(jīng)管畸形率為33.3%（4/12），平均胎鼠神經(jīng)管畸形率為3.6%，5mg/kg鎘處理組的窩神經(jīng)管畸形率高達(dá)75%（9/12），平均胎鼠神經(jīng)管畸形率為20.0%，同時(shí)鎘

5、暴露可致胎鼠體重減少，母體孕期鎘暴露對(duì)胎鼠體重的減少呈劑量反應(yīng)關(guān)系（劑量越高，胎鼠體重越輕）。此外，鎘暴露也會(huì)導(dǎo)致胎鼠身長(zhǎng)明顯減少；并且孕鼠孕期鎘暴露會(huì)損害胎盤的發(fā)育，對(duì)胎盤重量的減少呈劑量反應(yīng)關(guān)系（劑量越高，胎盤重量越輕）。相應(yīng)的鎘暴露也會(huì)導(dǎo)致胎盤直徑明顯減少，對(duì)胎盤的病理HE染色發(fā)現(xiàn)，鎘處理組的胎盤迷路層血管明顯減少。我們進(jìn)一步檢測(cè)了母體血清和胎鼠的葉酸水平，發(fā)現(xiàn)鎘處理組的胎盤葉酸水平明顯下降；此后，我們檢測(cè)了胎盤的葉酸轉(zhuǎn)運(yùn)泵Pcf