母鼠孕期補(bǔ)充褪黑素預(yù)防細(xì)菌脂多糖誘發(fā)的神經(jīng)管畸形.pdf

1、背景：細(xì)菌脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）與嚙齒動(dòng)物的多種不良妊娠結(jié)局有關(guān)，包括胎兒死亡、宮內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、神經(jīng)管畸形（neural tube defects，NTDs）和早產(chǎn)。目前的研究已經(jīng)證明褪黑素（melatonin，MT）可以預(yù)防LPS誘導(dǎo)的胎兒死亡、宮內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育遲緩和早產(chǎn)。
　　目的：研究孕期補(bǔ)充褪黑素對(duì)細(xì)菌脂多糖誘發(fā)的神經(jīng)管畸形的影響。
　　材料和方法：為探討MT對(duì)LPS誘發(fā)孕鼠神經(jīng)管畸形

2、的影響，62只孕鼠在受孕第0天（GD0）隨機(jī)分為4組：對(duì)照組(16只)，單純MT組(16只)，LPS組（15只）和LPS+MT組(16只)。LPS組和LPS+MT組孕鼠均于GD8至GD12每天經(jīng)腹腔注射給予25μg/kg的LPS，MT組和LPS+MT組孕鼠均于GD6至GD12每天經(jīng)灌胃方式給予50mg/kg的MT，對(duì)照組經(jīng)灌胃和腹腔注射給予等容量的生理鹽水。GD18剖殺所有孕鼠，記錄吸收胎、活胎、死胎、畸形胎數(shù)，檢測(cè)活胎仔身長(zhǎng)、體重、胎

3、盤重，評(píng)價(jià)活胎骨骼發(fā)育情況；為探討MT對(duì)LPS造成的葉酸轉(zhuǎn)運(yùn)的影響，將48只孕鼠隨機(jī)分為4組，每組12只，LPS組和LPS+MT組孕鼠均于GD8至GD12每天經(jīng)腹腔注射25μg/kg的LPS， MT組和LPS+MT組孕鼠均于GD6至GD12每天灌胃給予50mg/kg的MT。末次LPS處理后12h剖殺所有孕鼠，取母鼠血清和胚胎，并采用電化學(xué)免疫發(fā)光法檢測(cè)母血和胚胎葉酸水平；為探討MT對(duì)胎盤葉酸轉(zhuǎn)運(yùn)體基因和炎性細(xì)胞因子基因表達(dá)的影響，所有孕

4、鼠均隨機(jī)分為4組，每組12只：LPS組和LPS+MT組孕鼠均于GD10經(jīng)腹腔注射給予25μg/kg的LPS，MT組和LPS+MT組孕鼠從GD8至GD10每天灌胃給予50mg/kg的MT，LPS處理后2h剖殺半數(shù)孕鼠，取母體血清和胎盤，檢測(cè)胎盤促炎細(xì)胞因子和趨化因子基因表達(dá)水平。LPS處理后12h剖殺余下孕鼠，檢測(cè)胎盤葉酸受體和質(zhì)子偶聯(lián)葉酸轉(zhuǎn)運(yùn)體基因表達(dá)水平。
　　結(jié)果：LPS處理可導(dǎo)致66.67％（10/15）的孕鼠其子代發(fā)生神經(jīng)

5、管畸形，27.50％的胎鼠發(fā)生神經(jīng)管畸形，在補(bǔ)充褪黑素以后， LPS組窩畸形率降低至43.75%(7/16)，胎鼠畸形發(fā)生率下降到13.75%；LPS可引起胎鼠宮內(nèi)死亡、胎鼠胸骨畸形、肋骨畸形和枕骨骨化不全。上述結(jié)果提示，母鼠致畸敏感期暴露低劑量LPS可誘發(fā)胎鼠NTDs、胎鼠宮內(nèi)生長(zhǎng)受限和骨骼發(fā)育異常。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)：LPS處理后，胎盤葉酸轉(zhuǎn)運(yùn)泵－質(zhì)子偶聯(lián)葉酸轉(zhuǎn)運(yùn)體（Pcft）水平顯著下調(diào)，且發(fā)現(xiàn)LPS處理組胎鼠葉酸水平顯著低于對(duì)照組，

6、補(bǔ)充MT后可顯著上調(diào)Pcft和葉酸水平；LPS處理后，胎盤Tnf-α、Il-6、Il-1β等炎性細(xì)胞因子和Mcp-1、Mip-2、Kc趨化因子基因表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，LPS+MT組炎性細(xì)胞因子和趨化因子基因表達(dá)水平明顯低于LPS組。表明母鼠孕期補(bǔ)充MT顯著減輕LPS引起的母體和胎盤炎癥、上調(diào)Pcft的基因表達(dá)，減輕LPS引起的胎盤葉酸轉(zhuǎn)運(yùn)障礙，此外，MT處理可明顯預(yù)防LPS誘發(fā)的NTDs。
　　結(jié)論：母鼠孕期給予MT可通過抑制