RP105對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其對(duì)TLR4-PI3K-AKT信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：本文以攜帶RP105基因的復(fù)制缺陷型重組腺病毒（Ad-RP105）為載體在體轉(zhuǎn)染大鼠心肌，使 RP105在大鼠心肌組織中高表達(dá)，再構(gòu)建在體心臟缺血再灌注模型，并以TLR-4-PI3K-AKT信號(hào)通路為切入點(diǎn)，從基因、蛋白表達(dá)等方面研究RP105對(duì)心肌缺血再灌注（I/R）損傷的保護(hù)作用。
　　方法：SPF級(jí)雄性SD大鼠48只，隨機(jī)分為4組(n=12)：（1）Sham組：生理鹽水+假手術(shù)組(只穿線不結(jié)扎)；（2）I/R組：生理鹽

2、水+缺血再灌注組；（3）Ad-R組：Ad-RP105+缺血再灌注組（Ad-RP105為攜帶RP105基因的復(fù)制缺陷型重組腺病毒）；（4）Ad-G組： Ad-GFP+缺血再灌注組（Ad-GFP為攜帶綠色熒光蛋白基因的重組腺病毒)。通過心肌多點(diǎn)注射病毒轉(zhuǎn)染大鼠心肌；采用拉線壓管法建立大鼠在體心肌缺血再灌注（I/R）損傷模型；全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)大鼠血清LDH、 CK、CK-MB的活性；通過光學(xué)顯微鏡觀察心肌組織的病理形態(tài)變化；伊文思藍(lán)（Ev

3、ans blue）染色及氯化三苯基四氮唑(TTC)雙染色及計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)心肌缺血和梗死面積；Real-time PCR檢測(cè)心肌組織RP105、TLR-4、PI3K、AKT mRNA的表達(dá)水平；Western blot檢測(cè)心肌組織RP105、TLR-4、PI3K、AKT蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：（1）重組腺病毒轉(zhuǎn)染大鼠在體心肌，大鼠生存狀態(tài)良好，腺病毒轉(zhuǎn)染效率達(dá)91.5％。（2）大鼠結(jié)扎前、結(jié)扎即刻和恢復(fù)血流后Ⅱ?qū)?lián)心電圖

4、S-T波變化結(jié)果顯示符合缺血再灌注模型。（3）與Sham組比較，其余各組血清中LDH、CK、CK-MB濃度均顯著升高（P<0.05）；與IR組相比，經(jīng)目的基因RP105處理過的Ad-R組血清中LDH、CK、CK-MB濃度明顯降低（P<0.05），而Ad-G組無明顯差異。（4）光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果顯示，Sham組心肌組織形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)均正常；IR組與Ad-G組心肌組織損害嚴(yán)重，而Ad-R組心肌組織變性壞死得到明顯的改善。（5）Ad-R組心肌

5、梗死面積較IR組明顯減少（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而Ad-G組心肌梗死面積變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（6）與Sham組相比，Ad-R組RP105 mRNA及蛋白表達(dá)均顯著增加（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(7)與Sham組比較，缺血再灌注后各組心肌組織中TLR-4、PI3K、AKT mRNA及蛋白表達(dá)均增加；與IR組比較，Ad-R組心肌組織中TLR-4、PI3K、AKT mRNA及蛋白表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　

6、結(jié)論：（1）成功構(gòu)建攜帶目的基因RP105及缺血再灌注大鼠模型，重組腺病毒轉(zhuǎn)染對(duì)大鼠生理功能無明顯影響；（2）心肌組織RP105高表達(dá)，可顯著減輕心肌缺血再灌注損傷；（3）大鼠心肌缺血再灌注損傷過程中，TLR-4-PI3K-AKT信號(hào)通路被激活，心肌組織TLR-4、PI3K、AKT基因及蛋白表達(dá)水平顯著升高，參與缺血再灌注損傷發(fā)生的病理生理過程；（4）RP105可能通過抑制TLR-4-PI3K-AKT介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，減少對(duì)大鼠心肌缺