C3a、C5a在局灶節(jié)段腎小球硬化癥發(fā)病中的作用.pdf

1、背景：
　　局灶節(jié)段性腎小球硬化癥（focal segmental glomerulosclerosis，F(xiàn)SGS）是難治性腎病綜合征最常見的類型，激素治療時間長、抵抗率高，往往進展為終末期腎衰竭,給患者及其家庭造成極大的心理及經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。目前FSGS發(fā)病確切機制尚不清楚，現(xiàn)有研究主要聚焦在遺傳突變、循環(huán)滲透因子、機械應(yīng)力等非免疫因素導(dǎo)致的足細(xì)胞損傷與丟失。文獻報道多數(shù)C1q腎病患者病理表現(xiàn)為FSGS，近期研究顯示FSGS患者的尿液

2、及腎組織存在補體激活的證據(jù)，提示補體激活與FSGS發(fā)生有關(guān)。C3a、C5a是補體活化的關(guān)鍵致炎效應(yīng)分子，其在 FSGS中的作用國內(nèi)外未見報道，本項目組前期工作發(fā)現(xiàn) FSGS患者腎組織足細(xì)胞上C3a、C5a受體表達增強，提示 C3a、C5a可能參與了 FSGS的發(fā)病。本實驗應(yīng)用C3aR、C5aR雙基因敲除小鼠，通過建立經(jīng)典的局灶節(jié)段腎小球硬化癥-阿霉素腎病模型，探討補體C3a、C5a在局灶節(jié)段腎小球硬化癥發(fā)病中的作用。
　　目的：<

3、br>　　通過應(yīng)用 C3aR、C5aR雙基因敲除小鼠，建立經(jīng)典的局灶節(jié)段腎小球硬化癥-阿霉素腎病模型，探討補體 C3a、C5a在局灶節(jié)段腎小球硬化癥發(fā)病中的作用。
　　方法：
　　1）選取SPF級8-10周齡，體重25-30g健康雄性野生型，C3aR、C5aR雙基因敲除BALB/C小鼠，實驗共分為四組：正常對照組，野生組、C3aR敲除組、C5aR敲除組，其中野生組、C3aR敲除組、C5aR敲除組統(tǒng)稱為模型組，每組15只小鼠，

4、給予模型組經(jīng)尾靜脈一次性注射阿霉素10mg/kg，正常對照組注射等量的生理鹽水。
　　2）動態(tài)比較各組小鼠注射阿霉素前及注射阿霉素1、4、8、12周后一般狀況，24小時尿蛋白定量、血清白蛋白(ALB)、血清膽固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、血清肌酐(Cr)的變化。
　　3）將每組小鼠分別于第4、8、12周各處死5只,行過碘酸雪夫反應(yīng)染色( PAS)和馬松三色染色( MASSON),觀察腎臟組織病理變化情況。
　　4

5、）利用免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測WT1（腎母細(xì)胞瘤)在各組小鼠腎小球內(nèi)的表達，計數(shù)各組小鼠的足細(xì)胞數(shù)量，并行足細(xì)胞數(shù)量與24小時尿蛋白定量、血清肌酐的相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：
　　1）一般情況的比較對照組小鼠正常活動，正常飲食，而模型組小鼠注射阿霉素1周后精神欠佳，進食、活動量減少,4周之后所有小鼠均恢復(fù)正常。12周內(nèi)野生型組小鼠有5只死亡；C3aR敲除組有1只死亡；C5aR敲除組、對照組無死亡。
　　2）尿蛋白水平及血生

6、化水平比較模型組小鼠注射阿霉素1、4、8、12周后，24小時尿蛋白定量、血清甘油三酯、血清固醇、血清肌酐顯著增加（P均<0.05),而血清白蛋白顯著下降(P均<0.05)，模型組間野生組比C3aR、C5aR敲除組各項指標(biāo)改變明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0.05)。
　　3）腎臟病理改變 C3aR、C5aR敲除組比野生組小鼠腎臟病理明顯減輕。
　　4）WT1免疫組化計數(shù)足細(xì)胞數(shù)量隨著時間的進展，模型組WT1的陽性表達逐漸減少