PRMT2高表達(dá)對(duì)人甲狀腺癌TPC-1細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2（protein arginine methyltransferase2，PRMT2)高表達(dá)對(duì)甲狀腺癌TPC-1細(xì)胞增殖的影響，并初步探討其調(diào)控細(xì)胞周期蛋白D1（Cyclin D1，CCND1）的分子機(jī)制。
　　方法：將已構(gòu)建好的PRMT2慢病毒載體轉(zhuǎn)染TPC-1細(xì)胞，構(gòu)建TPC-1-PRMT2穩(wěn)定細(xì)胞株，采用蛋白免疫印跡（Western Blot）鑒定甲狀腺癌 TPC-1-PRMT2穩(wěn)定細(xì)胞株；設(shè)

2、立實(shí)驗(yàn)組即四環(huán)素誘導(dǎo)組(+Dox)，陰性對(duì)照組即未加四環(huán)素誘導(dǎo)組（-Dox）。以上述兩組細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，分別采用MTT檢測(cè)方法、克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖及克隆形成能力；Western Blot檢測(cè)甲狀腺癌中高表達(dá)PRMT2后對(duì)p-Akt、p-GSK-3β、CCND1蛋白表達(dá)的影響，并對(duì)其影響甲狀腺癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制進(jìn)行初步探討。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)判斷在普通甲狀腺癌TPC-1細(xì)胞中，PRMT2與TRβ的相互作用。
　　結(jié)果：1.

3、轉(zhuǎn)染TPC-1細(xì)胞后獲得TPC-1-PRMT2穩(wěn)定細(xì)胞株，經(jīng)四環(huán)素誘導(dǎo)后Western Blot檢測(cè)到PRMT2-3Flag蛋白的表達(dá)；
　　2. MTT檢測(cè)及克隆形成實(shí)驗(yàn)表明，PRMT2高表達(dá)后可降低TPC-1細(xì)胞的增殖能力；
　　3. Western Blot檢測(cè)提示，PRMT2高表達(dá)后p-Akt、p-GSK-3β、CCND1的表達(dá)均減少。而p-ERK蛋白的表達(dá)未見(jiàn)明顯減少。且不影響TRβ的表達(dá)。
　　4.免疫共沉