孟魯斯特及氯雷他定對人支氣管上皮細胞黏液蛋白分泌的影響.pdf

1、目的：
　　探討孟魯斯特及氯雷他定對脂多糖（LPS）誘導的人支氣管上皮細胞黏液蛋白分泌的影響
　　方法：
　　體外分離鑒定人原代支氣管上皮細胞，脂多糖（LPS）以1ug/mL劑量誘導細胞炎癥反應，孟魯斯特（50uM、20uM、10uM）、氯雷他定（25uM、5uM、1uM）進行干預治療，酶聯(lián)免疫法（Elisa）檢測分泌細胞上清黏蛋白5AC（mucin-5 subtype AC，MUC5AC）水平變化，并采用定量逆轉(zhuǎn)錄P

2、CR（RT-PCR）、免疫印跡Western-blot檢測MUC5AC mRNA和蛋白表達情況；DCFH-DA熒光探針檢測活性氧（ROS）變化；為進一步闡明機制，Western-Blot檢測孟魯斯特、氯雷他定干預治療前后，p-NF-κB(p65)、p-IκBα(Phospho-inhibitor ofκB)、p-ERK1/2(Phospho-extracellular-signal related kinase-1 and ERK2)活

3、化情況。
　　結(jié)果：
　?。?）脂多糖LPS以1ug/mL劑量體外誘導人支氣管上皮細胞48h，胞內(nèi)MUC5AC、IL-6以及ICAM-1蛋白水平升高明顯。
　?。?）設置實驗組別：空白組、LPS組、LPS+孟魯斯特(50uM、20uM、10uM)、LPS+氯雷他定(25uM、5uM、1uM)，結(jié)果表明MUC5AC mRNA水平和蛋白水平呈現(xiàn)藥物劑量依賴性降低(與LPS組相較，P<0.05)。
　?。?）細胞增殖與

4、毒性檢測培養(yǎng)基、空白組、LPS組、LPS+孟魯斯特(50uM、20uM、10uM)、LPS+氯雷他定(25uM、5uM、1uM)，多組間進行比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　?。?）DCFH-DA熒光探針檢測空白組、LPS組、LPS+孟魯斯特(50uM、20uM、10uM)、LPS+氯雷他定(25uM、5uM、1uM)，結(jié)果表明藥物有效抑制活性氧ROS產(chǎn)生。（5）Western-Blot結(jié)果表明p-ERK1/2以及p-IκBα