纖維素酶基因的克隆與遺傳轉(zhuǎn)化以及Cre-loxP系統(tǒng)的研究.pdf

1、利用纖維素酶使大量纖維素資源轉(zhuǎn)變成人類生活所需要的物質(zhì)，對于解決世界能源危機(jī)、糧食短缺、環(huán)境污染等問題具有十分重要的意義。另外，生物安全問題隨著現(xiàn)代生物技術(shù)，特別是重組DNA技術(shù)和基因工程的發(fā)展而逐漸成為全球關(guān)注的話題。利用Cre/loxP系統(tǒng)，刪除標(biāo)記基因（抗除草劑基因），對于生物安全問題具有重要意義。本論文的具體工作如下： 1、利用RT—PCR方法，從綠色木霉菌里克隆出了內(nèi)切葡聚糖苷酶基因（EGⅡ）和外切葡聚糖苷酶基因（CB

2、HⅡ），序列全長分別為1257bp和1589bp。其蛋白序列長度為418和471氨基酸。外切葡聚糖酶基因（CBHⅡ）具有三個(gè)內(nèi)含子和四個(gè)外顯子，而內(nèi)切葡聚糖酶基因（EG）沒有發(fā)現(xiàn)內(nèi)含子。 2、通過在EGⅡ基因3’端添加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留信號（KDEL序列），構(gòu)建了P3300—35S—EGⅡ—Tnos載體，并將其轉(zhuǎn)入煙草內(nèi)，經(jīng)PCR鑒定獲得7株轉(zhuǎn)基因植株。 3、利用Cre/loxP系統(tǒng)同雄性不育基因構(gòu)建表達(dá)載體，刪除標(biāo)記基因（抗除