Maresin 1通過miR-340逆轉(zhuǎn)膿毒癥巨噬細(xì)胞吞噬功能的抑制狀態(tài).pdf

1、背景:
　　膿毒癥(sepsis)是以全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)和菌血癥為特征的臨床危重病，重者可導(dǎo)致多器官衰竭，甚至死亡，是重癥監(jiān)護(hù)病房(ICU)的主要死亡原因，目前仍缺乏有效的藥物治療。研究證實(shí)巨噬細(xì)胞功能對(duì)膿毒癥的病理生理具有重要意義，而以往研究發(fā)現(xiàn)maresin1(MaR1)能促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬功能。
　　目的:
　　研究MaR1在小鼠盲腸結(jié)扎穿孔模型(CLP)和體外脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的膿毒癥模型中對(duì)巨噬

2、細(xì)胞吞噬功能的影響并探討其可能的機(jī)制。
　　方法:
　　熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀通過檢測(cè)F4/80的表達(dá)情況來評(píng)估小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和骨髓巨噬細(xì)胞的純度。檢測(cè)小鼠CLP模型和體外LPS誘導(dǎo)的膿毒癥模型，驗(yàn)證LPS和/或MaR1對(duì)miR-340表達(dá)的影響。小鼠骨髓巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-340模擬物(mimic)或抑制劑(inhibitor)后，qRT-PCR檢測(cè)miR-340的表達(dá)情況，測(cè)定轉(zhuǎn)染效率。熒光顯微鏡下觀察及流式細(xì)胞儀檢測(cè)

3、小鼠原代巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-340 mimic后巨噬細(xì)胞吞噬熒光微球能力的變化。最后收集臨床樣本檢測(cè)膿毒癥患者血漿中miR-340的表達(dá)與健康志愿組的區(qū)別。
　　結(jié)果:
　　1.熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀通過測(cè)定F4/80的表達(dá)情況評(píng)估小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和骨髓巨噬細(xì)胞的純度達(dá)90％以上，可用于實(shí)驗(yàn)。
　　2.在體小鼠CLP模型血漿和體外LPS誘導(dǎo)的膿毒癥模型均顯示MaR1能抑制LPS對(duì)miR-340的誘導(dǎo)表達(dá)(P＜0.05)

4、。
　　3.小鼠骨髓巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-340 mimic可增強(qiáng)miR-340的表達(dá)，并選取最佳轉(zhuǎn)染劑量和時(shí)間;而轉(zhuǎn)染miR-340 inhibitor卻不能抑制miR-340的表達(dá)。
　　4.熒光顯微鏡下觀察小鼠腹腔巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-340 mimic后，巨噬細(xì)胞吞噬熒光微球的能力顯著下降(P＜0.05);流式細(xì)胞儀檢測(cè)小鼠骨髓巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-340 mimic后，巨噬細(xì)胞吞噬熒光微球的能力亦減弱(P＜0.05)。<

5、br>　　5.臨床樣本血漿檢測(cè)，膿毒癥患者與健康志愿者相比，miR-340的表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　在體小鼠CLP模型和體外LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞膿毒癥模型驗(yàn)證了LPS能誘導(dǎo)miR-340的表達(dá)，這點(diǎn)與臨床膿毒癥患者的血漿檢測(cè)結(jié)果一致，而治療組(LPS+MaR1)又可以降低miR-340的表達(dá)。小鼠原代巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-340 mimic后，巨噬細(xì)胞的吞噬能力降低。大量研究表明膿毒癥的病理生理過程中，巨噬細(xì)胞