MiR-486通過靶向HAT1調(diào)節(jié)巨噬細胞膽固醇流出.pdf

1、目的:動脈粥樣硬化（Atherosclerosis,As）性疾病的罹患率以及致死率現(xiàn)如今已經(jīng)超過癌癥，位居中國人群死因的第一名，嚴重地威脅著人類的健康。三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1（ATP binding cassette transporter A1,ABCA1）是一種在介導(dǎo)細胞內(nèi)膽固醇流出的過程中發(fā)揮著重要作用的關(guān)鍵蛋白，該蛋白具有抗 As的作用。組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)移酶1（Histone Acetyltransferase1,HAT1）是

2、一種能夠促進組蛋白乙?；拿?。研究顯示，As的發(fā)生發(fā)展受到許多方面的因素影響，包括表觀遺傳學(xué)，但是核心組蛋白乙?；瘜BCA1的轉(zhuǎn)錄和表達，細胞內(nèi)膽固醇的流出，泡沫細胞的形成及As發(fā)生發(fā)展的機理尚未闡明。本研究以THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞為研究對象，探討表觀遺傳學(xué)因素對ABCA1的轉(zhuǎn)錄和表達，細胞內(nèi)膽固醇流出情況及其在細胞水平對As發(fā)生發(fā)展的影響。
　　方法:使用熒光定量PCR（Real-Time PCR）檢測THP-1巨噬細

3、胞源性泡沫細胞ABCA1的mRNA水平，Western Blot檢測ABCA1、HAT1的蛋白表達以及核心組蛋白H4第5位賴氨酸（H4K5）和第12位賴氨酸（H4K12）的乙酰化水平；通過在線生物信息學(xué)網(wǎng)站和熒光素酶報告基因分析預(yù)測并判斷miR-486的結(jié)合靶點；分別將miR-486 mimics和miR-486 inhibitor轉(zhuǎn)染至THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞后，使用液體閃爍計數(shù)儀（Liquid Scintillation Co

4、unter）檢測細胞內(nèi)膽固醇流出的情況，高效液相色譜（HPLC）檢測細胞內(nèi)膽固醇的含量。
　　結(jié)果:生物信息學(xué)在線網(wǎng)站預(yù)測結(jié)果和熒光素酶報告基因分析提示，miR-486直接靶向HAT13’UTR，下調(diào)其mRNA水平和蛋白表達；當(dāng)HAT1過表達時，THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞中ABCA1的mRNA水平和蛋白水平均升高，同時，H4K5和H4K12乙?；缴撸粚iR-486 mimics轉(zhuǎn)染至THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞后，再