大蒜素對TNBS誘導(dǎo)大鼠結(jié)腸炎的治療作用及IL-6-JAK-STAT3途徑探討.pdf

1、目的：炎癥性腸病是臨床上一類多種病因所導(dǎo)致的、機(jī)體異常免疫介導(dǎo)的腸道疾病，其突出特點(diǎn)是腸道反復(fù)發(fā)生的慢性非特異性炎癥，主要疾病類型包括克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎。既往大量的研究認(rèn)為，過度和失控的人體免疫產(chǎn)生針對腸道的正常腸黏膜及菌群免疫應(yīng)答導(dǎo)致IBD的病理生理改變。有研究顯示，大蒜素能夠調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，本實(shí)驗(yàn)使用TNBS/乙醇復(fù)制結(jié)腸炎模型，通過大蒜素干預(yù)以了解大蒜素在結(jié)腸炎中的治療作用并探討可能與IL-6/JAK/STAT3途徑相關(guān)。

2、>　　方法：50只SD雄性大鼠利用隨機(jī)數(shù)表法分5組，每組10只分別命名為：①空白對照組、②TNBS模型組、③大蒜素治療組、④美沙拉嗪治療組、⑤大蒜素+美沙拉嗪治療組。將空白對照組以外的其余四組大鼠使用一定劑量的5％TNBS+50％乙醇溶液灌腸后復(fù)制大鼠結(jié)腸炎模型，每日使用大蒜素（劑量:30mg/kg）、美沙拉嗪（劑量:30mg/kg）分別及聯(lián)合干預(yù)③-⑤組治療組;空白對照組及TNBS模型組使用相同劑量的生理鹽水灌胃，連續(xù)灌胃干預(yù)10天，

3、期間每日觀察大鼠毛發(fā)、精神狀態(tài)、進(jìn)食活動量等狀況。同時每日記錄大鼠體重，并觀察大鼠大便次數(shù)、性狀和血便等情況，然后進(jìn)行DAI評分。腹腔麻醉處死大鼠后，取其血清及結(jié)腸進(jìn)行相應(yīng)觀察、檢測;采集各組大鼠結(jié)結(jié)腸肉眼觀察其病變情況，HE染色處理大鼠結(jié)腸標(biāo)本，并進(jìn)行顯微鏡下觀察并進(jìn)行組織學(xué)評分。以ELISA方法檢測大鼠血清中白細(xì)胞介素6（IL-6）、白細(xì)胞介素10（IL-10）的水平，用免疫組化法檢測各組大鼠結(jié)腸組織細(xì)胞中STAT3、SOCS3的表

4、達(dá)情況并計(jì)數(shù)。使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法檢測結(jié)腸組織中STAT3、SOCS3mRNA表達(dá)量。利用專業(yè)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，得出相應(yīng)結(jié)果。
　　結(jié)果：⑴大蒜素治療組、美沙拉嗪治療組、大蒜素+美沙拉嗪治療組大鼠以及TNBS模型組與空白對照組比較各項(xiàng)比較，大鼠DAI評分、體重、結(jié)腸組織學(xué)評分、HE染色下病理改變等指標(biāo)均有顯著差異，結(jié)腸炎模型復(fù)制成功；⑵ELISA法檢測大鼠血清中IL-6水平，TNBS模型組與三組治療組均存在

5、顯著差異(p＜0.05)，從均值上來看，大蒜素+美沙拉嗪治療組檢測血清IL-6水平最低;ELISA法檢測大鼠血清中IL-10水平，TNBS模型組與三治療組均存在顯著差異(p＜0.05)，從均值上來看，大蒜素+美沙拉嗪治療組血清檢測IL-10水平最高，說明大蒜素具有抑制炎癥因子IL-6分泌的作用，而大蒜素聯(lián)合美沙拉嗪對炎癥因子的抑制作用最強(qiáng)；⑶免疫組化法顯示在用藥干預(yù)10天后，結(jié)腸組織中陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)上，STAT3中表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)最多的是T

6、NBS模型組，空白對照組表達(dá)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)最少，治療組間比較，大蒜素+美沙拉嗪治療組表達(dá)STAT3量最少，與大蒜素治療組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在SOCS3的陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)表達(dá)中，TNBS模型組分別與余下4組分別比較存在差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);治療組間比較，大蒜素+美沙拉嗪治療組表達(dá)SOCS3細(xì)胞計(jì)數(shù)最多，與大蒜素治療組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；⑷空白對照組的結(jié)腸粘膜中STAT3及SOCS3mRNA表達(dá)較少;TNBS模型組表達(dá)STAT3對比美沙拉

7、嗪治療組及大蒜素+美沙拉嗪治療組均明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，其中TNBS模型組與大蒜素+美沙拉嗪治療組比較差異更顯著;在SOCS3的表達(dá)中，TNBS模型組對比各治療組均明顯降低，有顯著差異(p＜0.05)。
　　結(jié)論：①本實(shí)驗(yàn)TNBS/乙醇法大鼠結(jié)腸炎復(fù)制模型成功；②各組大鼠死亡率、體重變化、病理組織學(xué)改變、血清學(xué)檢測水平等各方面檢測有差異，經(jīng)評估分析發(fā)現(xiàn)，大蒜素灌胃對IBD模型有一定治療作用，大蒜素聯(lián)合美沙拉嗪