大鼠脊髓損傷后β淀粉樣蛋白的表達變化及作用機制研究.pdf

1、目的:觀察大鼠脊髓損傷后β淀粉樣蛋白(Aβ)的表達變化，并應用γ分泌酶抑制劑DAPT降低Aβ蛋白表達，觀察其對大鼠功能恢復、神經(jīng)元存活和小膠質細胞活化的影響，探討Aβ蛋白在大鼠脊髓損傷中的作用機制。
　　方法:實驗一采用SD大鼠128只，隨機分為輕度損傷組（SCI-M組）、中度損傷組（SCI-Mo組）、重度損傷組（SCI-S組）和假手術組(Sham組)，每組各32只。按照Allen's打擊法進行T8節(jié)段脊髓打擊損傷，分別采用(1)

2、 BBB評分評估大鼠運動功能;(2)HE染色觀察脊髓損傷區(qū)形態(tài)學改變;(3)酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測大鼠血液及腦脊液中Aβ蛋白濃度水平;(4)免疫印跡法(Western blot)檢測大鼠脊髓組織中APP、Aβ表達變化;(5)對大鼠血清和腦脊液中Aβ蛋白水平與BBB評分做Pearson相關性分析;實驗二采用SD大鼠96只，隨機分為脊髓損傷組(SCI)、治療組(DAPT)、假手術組(Sham)，每組各32只。分別采用(1) BB

3、B評分評估大鼠運動功能恢復情況;(2)HE染色觀察脊髓損傷區(qū)形態(tài)學變化;(3)尼氏染色觀察脊髓前角運動神經(jīng)元形態(tài)及神經(jīng)元細胞計數(shù);(4)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清和腦脊液中Aβ蛋白濃度水平，以及血清中IL-1β、 IL-6、TNF-α等炎癥因子水平;(5)免疫印跡法（Western blot）檢測脊髓組織中APP和Aβ表達變化;(6)免疫熒光試驗觀察脊髓中Aβ、Iba-1等陽性細胞及共染情況。
　　結果:實驗一(1)大

4、鼠SCI術后BBB評分下降;(2)大鼠SCI后12h血液及腦脊液中Aβ蛋白水平開始升高，至損傷后3d升至高峰(P＜0.05)，各損傷組蛋白水平升高幅度隨損傷程度加重而增高，損傷后28d SCI-S組仍高于Sham組水平(P＜0.05);(3)SCI后1d和3d大鼠脊髓組織中Aβ蛋白表達明顯增高(P＜0.05)，各損傷組脊髓組織Aβ蛋白表達水平隨損傷嚴重程度加重而增加;(4) SCI后3d大鼠血清和腦脊液Aβ蛋白水平與損傷后28d運動功能

5、BBB評分均呈負相關(P＜0.01)。實驗二(1) DAPT組大鼠運動功能評分自SCI后14d始明顯高于SCI組(P＜0.05);(2)HE染色發(fā)現(xiàn)SCI后3d和14d DAPT組大鼠脊髓背側白質和灰質區(qū)壞死程度明顯輕于SCI組;(3)尼氏染色發(fā)現(xiàn)SCI后3d和14d DAPT組大鼠脊髓前角運動神經(jīng)元計數(shù)明顯高于SCI組(P＜0.05);(4) ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)SCI后12h DAPT組大鼠血清和腦脊液中Aβ蛋白水平明顯低于SCI組

6、(P＜0.05);(5) Western blot檢測發(fā)現(xiàn)SCI后3d DAPT組和SCI組大鼠脊髓組織APP蛋白表達較Sham組均明顯增高(P＜0.05)，DAPT組Aβ蛋白表達較SCI組明顯降低(P＜0.05);(6)免疫熒光實驗發(fā)現(xiàn)DAPT組大鼠脊髓前角運動神經(jīng)元區(qū)Aβ和Iba-1陽性細胞數(shù)明顯低于SCI組(P＜0.05)，免疫熒光共染發(fā)現(xiàn)DAPT組大鼠脊髓前角運動神經(jīng)元區(qū)NeuN陽性神經(jīng)元細胞中Aβ表達較SCI組明顯減少(P＜0

7、.05);(7)損傷后3d DAPT組大鼠血清IL-1、IL-6、TNF-α水平較SCI組明顯降低(P＜0.05)。
　　結論:(1)大鼠SCI后早期Aβ蛋白表達升高，其升高水平呈現(xiàn)時間依賴性，且Aβ蛋白升高水平隨SCI嚴重程度加重而增高。(2)大鼠SCI后血清和腦脊液中Aβ蛋白水平越高，運動功能恢復越差，監(jiān)測血清和腦脊液中Aβ蛋白水平對于脊髓損傷的評估可能具有一定的參考價值。(3)大鼠SCI后脊髓中APP、Aβ蛋白表達增多，導致