LncRNA MALAT1降低非小細胞肺癌對吉非替尼藥物敏感性的研究.pdf

1、目的:
　　研究長鏈非編碼RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)人肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1基因(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript1,MALAT1)在非小細胞肺癌患者血清中的表達及MALAT1與非小細胞肺癌臨床病理特征的相關(guān)性。通過轉(zhuǎn)染MALAT1-siRNA前后表皮生長因子受體(Epidermal Growth FactorReceptor

2、,EGFR)野生型細胞株A549對吉非替尼敏感性的變化,探討MALAT1與表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑EGFR-TKI(Epidermal Growth FactorReceptor-Tyrosine Kinase Inhibitor)耐藥之間的關(guān)系。
　　方法:
　　應用實時熒光定量PCR方法檢測90例非小細胞肺癌患者血清中MALAT1表達水平,并與30例肺良性腫瘤患者及30例健康體檢者比較。分別檢測四種非小細胞肺癌細

3、胞株A549、H1299、95D、HCC827中MALAT1表達水平及對吉非替尼IC50,CCK法檢測轉(zhuǎn)染MALAT1-siRNA前后A549細胞對吉非替尼IC50變化,流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后A549細胞凋亡水平。
　　結(jié)果:
　　1.非小細胞肺癌患者與健康對照組相比,血清中MALAT1表達存在差異,且差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);肺良性腫瘤患者與健康對照組相比,血清中 MALAT1表達無差異(P＞0.05)。MALAT

4、1在非小細胞肺癌患者血清中的表達與其年齡、性別、吸煙、病理類型、腫瘤直徑、遠處轉(zhuǎn)移等無相關(guān)性,與分化程度(P＜0.01)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P＜0.05)、TNM分期(P＜0.05)有關(guān)且差異有統(tǒng)計學意義。
　　2.與HCC827(EGFR突變型)細胞株相比,MALAT1在A549(EGFR野生型)、H1299(EGFR野生型)、95D(EGFR野生型)細胞株中表達上調(diào),差異有統(tǒng)計學意義。
　　3.A549(EGFR野生型)、H1

5、299(EGFR野生型)、95D(EGFR野生型)細胞株IC50值(39.43±4.43μM、26.93±0.67μM、25.27±1.94μM)明顯高于HCC827(EGFR突變型)(0.006±0.01μM),差異有統(tǒng)計學意義。
　　4.加入不同濃度吉非替尼的MALAT1-siRNA細胞的生長抑制率均高于相應濃度的NC細胞,MALAT1-siRNA組吉非替尼的IC50(9.6±2.95)明顯低于NC組(29.91±2.94),

6、A549細胞對吉非替尼的耐藥性下降了2.12倍,差異有統(tǒng)計學意義。
　　5.流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后吉非替尼作用48小時A549細胞凋亡結(jié)果顯示,陰性對照轉(zhuǎn)染組(NC)與MALAT1-siRNA轉(zhuǎn)染組(M)平均凋亡率分別為9.20±1.85％、10.24±3.43％,轉(zhuǎn)染陰性對照吉非替尼組(NC+G)與轉(zhuǎn)染MALAT1-siRNA吉非替尼組(M+G)平均凋亡率分別為14.57±0.41％、21.48±2.47％,轉(zhuǎn)染MALAT1-si

7、RNA吉非替尼組(M+G)與轉(zhuǎn)染陰性對照吉非替尼組(NC+G)相比凋亡率增加且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.非小細胞肺癌患者血清中MALAT1表達顯著高于肺良性腫瘤患者及健康對照組,提示MALAT1在非小細胞肺癌患者血清中異常表達。血清中MALAT1的表達與患者年齡、性別、吸煙、病理類型、腫瘤直徑、遠處轉(zhuǎn)移等均無關(guān),與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān),提示血清中MALAT1可以初步反映非小細胞肺

8、癌疾病進展程度。
　　2.MALAT1在非小細胞肺癌細胞株A549(EGFR野生型)、H1299(EGFR野生型)、95D(EGFR野生型)中表達水平顯著高于HCC827(EGFR突變型),提示EGFR野生型細胞株中MALAT1較EGFR突變型細胞株高表達。
　　3.A549、H1299、95D三種EGFR野生型細胞株對吉非替尼的IC50顯著高于EGFR突變型細胞株HCC827,提示EGFR野生型細胞株對吉非替尼耐藥,EGF