miR-200c增強人肺癌A549細胞對紫杉醇及吉非替尼敏感性及其機制研究.pdf

1、目的:
　　觀察上調肺癌A549細胞miR-200c表達對紫杉醇、吉非替尼藥物敏感性及兩藥聯(lián)合作用的影響,并從分子水平探討其發(fā)生的可能作用機制。
　　方法:
　　1.細胞轉染及轉染效率的檢測:運用脂質體2000瞬時轉染肺癌A549細胞,分別轉染miR-200c mimic(轉染組)、mimic NC(陰性對照組),只加入培養(yǎng)基為空白對照組,采用實時定量PCR檢測各組miR-200c及靶基因ZEB1表達量,比較各組間表達

2、差異。
　　2.實驗分組及藥物處理:轉染組及陰性對照組分別加入紫杉醇(miR-200c-T組和 Control-T組)、吉非替尼(miR-200c-G組和 Control-G組)、兩藥聯(lián)合(miR-200c-G+T組和 Control-G+T組),并設立不加藥物組(miR-200c組和Control組)。
　　3. MTT法觀察轉染后紫杉醇、吉非替尼及兩藥聯(lián)合對肺癌A549細胞敏感性的影響。
　　4. Western

3、Blot檢測轉染后給予藥物處理各組細胞TUBB3蛋白、EGFR、Akt、MAPK磷酸化蛋白及總蛋白表達變化。
　　結果:
　　1.細胞轉染后,實時定量PCR檢測miR-200c及ZEB1表達結果顯示:轉染組與陰性對照組和空白對照組相比,miR-200c表達明顯升高,P<0.01;ZEB1表達明顯降低,P<0.01。
　　2. MTT觀察不同藥物處理后對A549細胞敏感性的影響:miR-200c-T組與Control-T

4、組和miR-200c組相比,miR-200c-G組與Control-G組和miR-200c組相比較,細胞增殖抑制率增加,P<0.05。miR-200c-G+T組與Control-G+T組相比, miR-200c-G+T組與miR-200c-T組、miR-200c-G組比較,細胞增殖抑制率無明顯差異,P>0.05。
　　3. Western Blot結果顯示加入紫杉醇后,miR-200c-T組與 Control-T組和miR-200

5、c組比較,TUBB3蛋白表達顯著降低,P<0.01。加入吉非替尼后, miR-200c-G組與Control-G組和miR-200c組相比,EGFR、Akt磷酸化蛋白表達降低,P<0.05;MAPK磷酸化蛋白及總蛋白、EGFR、Akt總蛋白表達無明顯差異,P>0.05。加入紫杉醇聯(lián)合吉非替尼后,miR-200c-G+T組與Control-G+T組比較,EGFR、Akt、MAPK磷酸化蛋白及總蛋白表達無明顯差異,P>0.05。miR-20

6、0c-G+T組與miR-200c-G組比較,EGFR、Akt磷酸化蛋白表達無明顯差異,P>0.05;miR-200c-G+T組與miR-200c-T組比較,EGFR、Akt磷酸化蛋白表達降低,P<0.05。
　　結論:
　　1. miR-200c可通過抑制TUBB3蛋白表達增強紫杉醇對肺癌A549細胞的敏感性。
　　2. miR-200c可能通過抑制EGFR和Akt磷酸化蛋白表達提高吉非替尼對肺癌A549細胞敏感性。<