三種基因多態(tài)性與血脂及缺血性心腦血管疾病關(guān)系的研究.pdf

1、第一章GCKR SNPs與血脂及缺血性心腦血管疾病的關(guān)系
　　背景：葡萄糖激酶（GCK）是哺乳動(dòng)物胰腺β-細(xì)胞中主要的葡萄糖傳感器，增加胰島素分泌，調(diào)節(jié)血糖平衡。GCK還參與調(diào)節(jié)肝臟中的糖原合成和糖質(zhì)新生。GCK的作用受葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白（GCKR）介導(dǎo)。近年來(lái)，全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)發(fā)現(xiàn)GCKR基因多態(tài)性與高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)水平密切相關(guān)。然而，關(guān)于GCKR基

2、因多態(tài)性與冠心病（CHD）、缺血性腦卒中(IS)的研究較少，且結(jié)果不盡一致。開展GCKR基因多態(tài)性血脂及缺血性心腦血管疾病的研究有助于了解其在血脂代謝中的作用，對(duì)于研發(fā)新的干預(yù)措施，提高缺血性心腦血管疾病的整體防治水平具有重要意義。
　　目的：本文旨在探討GCKR單核苷酸多態(tài)性（SNPs）rs1260326和rs8179206對(duì)血脂水平的影響，以及與缺血性心腦血管疾病即CHD和IS發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。
　　方法：本研究是基于廣西

3、地區(qū)漢族群體的病例-對(duì)照研究，共收集樣本1736例,其中CHD病人584例，IS病人555例，正常對(duì)照組597例。以調(diào)查問(wèn)卷形式收集研究對(duì)象一般信息及臨床資料，提取全血基因組DNA。采用文獻(xiàn)報(bào)道與功能位點(diǎn)結(jié)合的位點(diǎn)選擇策略，選擇在 GWAS中與血脂相關(guān)聯(lián)的 GCKR rs1260326和 rs8179206 SNPs作為研究位點(diǎn)?；蚍中筒捎肧napshot技術(shù)，對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行基因分型，完成對(duì)研究對(duì)象血脂水平等生化指標(biāo)的檢測(cè)。研究分二步

4、進(jìn)行：第一步，在597個(gè)廣西漢族正常對(duì)照組與584名廣西漢族CHD病人和555名IS病人之間進(jìn)行，比較病例組與對(duì)照組之間的一般情況、血脂水平、基因型或等位基因頻率分布有無(wú)差異，并估算GCKR rs1260326和 rs8179206 SNPs與CHD及 IS的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。第二步：分別探討病例組及正常對(duì)照組各組中和合并人群中（1736例樣本）各基因型與血脂水平的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.CHD組的BMI、脈壓、血清TG水

5、平與正常對(duì)照組相比都要顯著的高，而血清TC水平、HDL-C、ApoA1水平、ApoA1/ApoB和飲酒的人的比例比正常對(duì)照組低。與正常對(duì)照組相比，IS組的BMI,收縮壓,脈壓和血清 TG水平高，而血清 TC、HDL-C、ApoA1、ApoA1/ApoB和飲酒的人的比例低；rs1260326和 rs8179206 SNPS基因型及等位基因頻率分布在病例組與對(duì)照組中均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，所選擇的樣本具有群體代表性。

6、正常對(duì)照組與病例組各基因型或等位基因頻率分布上未見(jiàn)顯著差異。rs1260326 SNP TT基因型可降低女性IS患者的風(fēng)險(xiǎn)。
　　2. CHD組及正常對(duì)照組的rs1260326 SNP基因型間的的血清TG和LDL-C水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。調(diào)整年齡、性別、BMI、血壓、飲酒、吸煙因素后，CHD組中，rs1260326 SNP TT基因型較CC/CT基因型有較高的血清TG水平；正常對(duì)照組中，rs1260326 SNP TT基因型較

7、CC/CT基因型有較高的血清LDL-C水平；合并人群中，rs1260326 SNP TT基因型有較低的HDL-C水平。
　　結(jié)論：GCKR rs1260326 SNP與血清增高的LDL-C、TG及降低的HDL-C水平相關(guān)，其對(duì)血脂的影響有促動(dòng)脈粥樣硬化作用；病例-對(duì)照研究中rs1260326 SNP TT基因型可降低女性IS患者的風(fēng)險(xiǎn)。rs8179206 SNP與血脂水平、CHD及IS發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)均無(wú)明顯關(guān)系。
　　第二章CEL

8、SR2-PSRC1-SORT1 SNPs與血脂及缺血性心腦血管疾病的關(guān)系
　　背景：過(guò)去十年，GWAS已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在不同人群中位于染色體1P13.3區(qū)域的SNPs與CHD風(fēng)險(xiǎn)、TC、LDL-C水平密切相關(guān)。這個(gè)區(qū)域包含了3個(gè)基因：CELSR2（鈣粘著蛋白，EGF LAG七跨G型受體2）基因，PSRC1（富含脯氨酸/絲氨酸卷曲螺旋蛋白1抗體）基因和SORT1（分揀蛋白1）基因。因此對(duì)血脂水平及動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)性疾病的發(fā)生、發(fā)展產(chǎn)生重要的

9、作用。CHD與IS是世界上發(fā)病率、致死率較高的疾病，有著共同的危險(xiǎn)因素。然而，關(guān)于CELSR2-PSRC1-SORT1 SNPs與廣西漢族人群的血脂及缺血性心腦血管疾病的關(guān)系研究甚少。
　　目的：本文旨在探討CELSR2-PSRC1-SORT1 rs599839，rs464218和rs6698443 SNPs對(duì)血脂水平的影響，以及與缺血性心腦血管疾病即CHD和IS發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。
　　方法：選擇在GWAS中與血脂相關(guān)聯(lián)的CE

10、LSR2-PSRC1-SORT1 rs599839，rs464218和 rs6698443作為研究位點(diǎn)。采用Snapshot技術(shù)對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行基因分型。完成對(duì)研究對(duì)象流行病學(xué)的調(diào)查、血脂水平等生化指標(biāo)的檢測(cè)。本研究分二步，第一步：在590個(gè)廣西漢族正常對(duì)照組與561名廣西漢族CHD病人和527名IS病人之間進(jìn)行，比較病例組與對(duì)照組之間的一般情況、血脂水平、基因型或等位基因頻率分布有無(wú)差異，分別探討病例組及正常對(duì)照組各組中和合并人群中（1

11、678例樣本）各基因型與血脂水平的關(guān)系。第二步：估算CELSR2-PSRC1-SORT1 rs599839、rs464218和 rs6698443與CHD及 IS的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1、rs599839、rs464218和rs6698843 SNPs基因型及等位基因頻率分布在病例組與對(duì)照組中均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，所選擇的樣本具有群體代表性。正常對(duì)照組與CHD組各基因型或等位基因頻率分

12、布上未見(jiàn)顯著差異。正常對(duì)照組與IS組rs599839 SNP的基因型及等位基因頻率分布存在顯著差異，正常對(duì)照組人群 A和 G等位基因頻率分別為94.7％和5.3%，IS組人群分別為92.3%和7.7%;正常對(duì)照組人群 AA、AG和 GG基因型頻率分別為89.3%、10.7%和0%，IS組人群分別為85.2%、14.2%和0.6%。調(diào)整年齡、性別、BMI、血壓、飲酒、吸煙因素后，CHD組中，與非攜帶G等位基因的攜帶者相比，rs599839

13、 SNP攜帶G等位基因的攜帶者有較高的HDL-C水平。IS組中，rs464218 SNP中攜帶G等位基因的攜帶者有較高的HDL-C水平。
　　2、采用logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)CELSR2-PSRC1-SORT1 rs599839、rs464218和rs6698843 SNPs與CAD和IS發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)相關(guān)性。
　　結(jié)論：本研究結(jié)果顯示，CELSR2-PSRC1-SORT1 rs599839和rs464218 SNPs與增高

14、的HDL-C水平相關(guān)，可能在動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中起保護(hù)作用。但并未發(fā)現(xiàn)CELSR2-PSRC1-SORT1 rs599839、 rs464218和rs6698443 SNPs與CHD及IS發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。
　　第三章HNF1A SNPs與血脂及缺血性心腦血管疾病的關(guān)系
　　背景：最近，GWAS已經(jīng)發(fā)現(xiàn)HNF1A基因影響血脂及血糖代謝，而且發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞核因子1A(HNF1A)基因突變可引發(fā)年輕起病成人型糖尿?。∕ODY）。在中國(guó)漢族

15、人群中，HNF1A基因多態(tài)性與血脂水平、CHD及IS發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的研究甚少，在歐美人群中得到的結(jié)果也不盡一致。
　　目的：探討 HNF1A SNPs與血脂水平的關(guān)系，及基因與環(huán)境的交互作用對(duì)血脂的影響。進(jìn)一步探討這些SNPs與缺血性心腦血管疾?。–HD，IS）的關(guān)系。
　　方法：采用文獻(xiàn)報(bào)道與功能位點(diǎn)結(jié)合的位點(diǎn)選擇策略，選擇在GWAS中與血脂相關(guān)聯(lián)的HNF1A rs1169288、 rs2259820、 rs2464196和

16、rs2650000作為研究位點(diǎn)。采用Snapshot技術(shù)對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行基因分型。完成對(duì)研究對(duì)象流行病學(xué)的調(diào)查、血脂水平等生化指標(biāo)的檢測(cè)。該研究分三步進(jìn)行：第一步，在594個(gè)廣西漢族正常對(duì)照組與562名廣西漢族CHD病人和527名IS病人之間進(jìn)行，比較病例組與對(duì)照組之間的一般情況、血脂水平、基因型或等位基因頻率分布有無(wú)差異，探討病例組及正常對(duì)照組各組中各基因型與血脂水平的關(guān)系。第二步：進(jìn)一步計(jì)算HNF1A rs1169288、 rs225

17、9820、 rs2464196和rs2650000與CHD及 IS的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。第三步，進(jìn)一步分析基因與吸煙、飲酒和 BMI的交互作用對(duì)血脂的影響，采用Snpstats在線軟件分析基因與環(huán)境的交互作用對(duì)冠心病及缺血性腦卒中的影響。
　　結(jié)果：
　　1、HNF1A rs1169288、 rs2259820、rs2464196和rs2650000 SNPs基因型及等位基因頻率分布在病例組與對(duì)照組中均符合Hardy-Weinb

18、erg遺傳平衡定律，所選擇的樣本具有群體代表性。CHD和IS組4個(gè) SNPs基因型及等位基因頻率與對(duì)照組相比未見(jiàn)顯著差異。調(diào)整年齡、性別、BMI、血壓、飲酒、吸煙因素后，經(jīng)Bonferroni校正后，對(duì)照組中，與非攜帶C等位基因的攜帶者相比，rs1169288 SNP攜帶C等位基因的攜帶者有較高的TG水平。CHD組中，與非攜帶T等位基因和A等位基因的攜帶者相比，rs2259820 SNP攜帶T等位基因和rs2464196攜帶A等位基因的

19、攜帶者有較高的ApoA1水平。
　　2、rs2259820 SNP的基因型與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的模型有：Codominant模型：TT vs. CC(OR=0.64,95%CI:0.44-0.91，P=0.015);Recessive模型：CT/TT vs. CC(OR=1.47，95%CI:1.06-2.03，P=0.020);rs2464196 SNP的基因型與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的模型有：Codominan

20、t模型：AA vs. GG(OR=0.62,95%CI:0.43-0.89，P=0.010);Recessive模型：GG/GA vs. AA(OR=1.51，95%CI:1.09-2.08，P=0.014);rs1169288、 rs2259820、 rs2464196和rs2650000 SNPs與IS的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)相關(guān)。因?yàn)樗鼈冎g存在連鎖不平衡，在對(duì)這4個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行單倍體分析時(shí)發(fā)現(xiàn)：?jiǎn)伪扼wA-C-G-A有較高的CHD風(fēng)險(xiǎn)(OR:1.

21、95,95%CI:1.13-3.37，P=0.015)。總體的 P值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、發(fā)現(xiàn)2個(gè)SNPs的基因型與吸煙、飲酒及 BMI存在不同程度的交互作用對(duì)血脂水平產(chǎn)生影響。rs2259820與飲酒的交互作用對(duì)血清 TG水平有影響，但經(jīng)過(guò) Bonferroni校正后無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。rs2464196與飲酒的交互作用對(duì)血清LDL-C水平有影響，但經(jīng)過(guò)Bonferroni校正后無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4、單倍體與吸煙的交互作用對(duì)

22、冠心病存在影響，以不吸煙中的單倍體A-C-G-C做為參考，不吸煙中A-C-G-A[OR0.51(0.26-0.98)]有著降低的冠心病風(fēng)險(xiǎn)。單倍體與性別及飲酒的交互作用都對(duì)腦卒中存在影響（P=0.011，P=0.033）。男性中，單倍體A-C-G-A有著降低腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)[OR0.26(0.08-0.80)]。以不飲酒的單倍體A-C-G-C做為參考，飲酒中的單倍體A-T-A-C有著降低的腦卒中風(fēng)險(xiǎn)[OR0.43(0.20-0.93)]，不

23、飲酒的單倍體A-T-A-C有著增加的腦卒中風(fēng)險(xiǎn)[OR1.61(1.05-2.47)]。
　　結(jié)論：rs1169288 SNP與血清增高的TG水平，而rs2259820和rs2464196 SNPs與血清增高的ApoA1水平有關(guān)，影響血脂代謝。病例-對(duì)照研究中 rs2259820和rs2464196 SNPs與降低的 CHD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，單體型分析顯示其單倍體與CHD發(fā)病相關(guān)，與血脂和疾病的關(guān)系存在一致性，但未發(fā)現(xiàn)rs116928