蜆殼花椒主要有效成分的提取制備工藝及其相關(guān)生理活性研究.pdf

1、蜆殼花椒（Zanthoxylum dissitum Hemsl），中藥名單面針，蕓香科花椒屬木質(zhì)藤本植物，能解毒消腫、祛風(fēng)活絡(luò)、散瘀止痛，是很多中成藥生產(chǎn)的原材料。由于蜆殼花椒有效成分及其生理活性研究的不足，蜆殼花椒不能得到科學(xué)合理利用，致使其有效成分利用率低，藥用價(jià)值開發(fā)受到限制，造成一定的資源浪費(fèi)。蜆殼花椒目前完全處于野生狀態(tài)，自然生境面較窄，且自然繁殖率低，生長緩慢，自然資源有限，再加上人們的掠奪式開發(fā)，蜆殼花椒已成為漸危物種。為

2、科學(xué)合理利用蜆殼花椒藥材，進(jìn)一步開發(fā)其藥用價(jià)值，緩解蜆殼花椒資源危機(jī)，本課題研究了蜆殼花椒中主要有效成分的提取制備工藝及其相關(guān)生理活性，主要研究結(jié)果如下:
　　(1)通過單因素試驗(yàn)和L9（34）正交試驗(yàn)研究了蜆殼花椒總生物堿的提取工藝，確定了總生物堿提取的最優(yōu)工藝參數(shù)為:用20倍量80％乙醇浸泡24h，50℃超聲提取1.5h，過濾，重復(fù)提取1次，用此工藝條件，總生物堿提取率為11.82mg/g。通過篩選，選擇NKA-9樹脂用于總生

3、物堿的分離純化，具體工藝條件為:生藥與樹脂比為1∶1（g/g），調(diào)節(jié)上樣液pH為7.0，上樣流速2BV/h，洗脫時(shí)，用6BV80％乙醇以2BV/h進(jìn)行洗脫，所得總生物堿平均純度為32.9％。
　　(2)選擇影響總黃酮提取的因素，進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)，得到總黃酮的最佳提取條件為:采用15倍量(mL/g)的70％乙醇浸泡24h，50℃超聲提取1.5h，重復(fù)提取1次，最大提取率達(dá)到4.78mg/g。選用AB-8型樹脂用于總黃酮的分離

4、純化，最佳工藝條件為:上樣液濃度為1.5mg/mL，pH值為6.0，流速2.0mL/min，洗脫時(shí)采用140mL70％乙醇，2mL/min進(jìn)行動態(tài)解吸附。對該工藝條件提取純化的總黃酮進(jìn)行純度鑒定，純度達(dá)69.57％。
　　(3)通過開展單因素試驗(yàn)和L9（34）正交試驗(yàn)研究蜆殼花椒蒽醌的提取工藝，確定蒽醌類物質(zhì)提取的最優(yōu)條件為:用15倍量50％乙醇浸泡24h，60℃超聲提取40min，提取兩次，蒽醌類化合物提取率可達(dá)1.59mg/g

5、。通過篩選，S-8型樹脂最適于蒽醌類物質(zhì)的分離純化，最優(yōu)工藝參數(shù)為:用pH為9.0、濃度為0.8mg/mL的蒽醌提取液以2BV/h進(jìn)行動態(tài)吸附，吸附完成后用80％乙醇以3BV/h進(jìn)行解吸附，分離純化后蒽醌類化合物純度達(dá)到45.5％。
　　(4)通過K-B瓊脂擴(kuò)散法（紙片法）和最小抑菌濃度法探究了蜆殼花椒中各組分的抑菌活性，結(jié)果表明，總生物堿對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均有較強(qiáng)的抑制能力，MIC分別為0.8 mg/mL、0.4 mg/

6、mL;總黃酮對金黃色葡萄球菌的抑制能力較強(qiáng)，對大腸桿菌的抑制能力弱，MIC分別為0.4 mg/mL、1.6mg/mL;蒽醌類物質(zhì)對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制能力均較弱，在較高濃度下才表現(xiàn)出抑菌活性。
　　(5)開展各組分對DPPH和羥基自由基清除率的研究，并與常用天然抗氧化劑Vc比較，結(jié)果表明Vc及蜆殼花椒各組分抗氧化能力的大小依次是Vc＞總黃酮＞總生物堿＞蒽醌，說明蜆殼花椒各組分中蒽醌類化合物抗氧化能力較弱，黃酮類化合物抗氧