絲素蛋白水凝膠對神經(jīng)元生長及遷移的影響研究.pdf

1、目的:搜集并分析神經(jīng)損傷的臨床病例，總結(jié)目前神經(jīng)損傷修復(fù)治療的現(xiàn)狀。研究并設(shè)計出各向異性結(jié)構(gòu)的絲素蛋白凝膠材料，用來作為神經(jīng)細(xì)胞體外生長基質(zhì)，檢測絲素蛋白水凝膠的生物相容性，探討絲素蛋白凝膠材料的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)對神經(jīng)元貼附、生長和遷移的引導(dǎo)作用，以及絲素蛋白水凝膠在周圍神經(jīng)再生領(lǐng)域臨床應(yīng)用的可能性。
　　方法:本研究內(nèi)容主要分為兩大部分：第一部分是對有關(guān)周圍神經(jīng)損傷修復(fù)的臨床病例進(jìn)行病例分析。第二部分是基礎(chǔ)實驗部分，實驗方法主要包括(1

2、)利用靜電斥力和靜電引力的平衡原理制備分層排列的絲素蛋白水凝膠，掃描電鏡下觀察并證實絲素蛋白水凝膠的取向構(gòu)成。(2)利用酶消化法分離培養(yǎng)新生24h內(nèi)SD大鼠的大腦皮質(zhì)神經(jīng)元，利用MAP-2免疫熒光法進(jìn)行神經(jīng)元鑒定，并將神經(jīng)元接種到絲素蛋白水凝膠材料上，進(jìn)行MAP-2、βⅢ-tubulin免疫熒光復(fù)合染色，觀察培養(yǎng)神經(jīng)元的形態(tài)及軸突和樹突的形成情況。(3)利用Image J軟件進(jìn)行神經(jīng)元取向分析，評價絲素蛋白水凝膠的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)對神經(jīng)元突起生

3、長和分布的影響情況。
　　結(jié)果:1.周圍神經(jīng)損傷是臨床上一種常見的疾病，所引起的不良的預(yù)后給患者及其家庭帶來非常大的壓力，目前臨床上多采用神經(jīng)斷端直接縫合的方式進(jìn)行修復(fù)損傷神經(jīng)，在復(fù)雜神經(jīng)損傷的修復(fù)中存在很大的局限性，需要尋找新的方法來更好的完成神經(jīng)修復(fù)。2.成功將不同濃度絲素蛋白水溶液通過靜電相互作用的方法制備成各向異性結(jié)構(gòu)的水凝膠，在電場作用下，靜電引力誘導(dǎo)納米纖維纏繞形成納米結(jié)構(gòu)，納米纖維間的靜電斥力誘導(dǎo)片層結(jié)構(gòu)形成。3.M

4、AP-2免疫熒光證實了分離培養(yǎng)的神經(jīng)元，MAP-2、βⅢ-tubulin免疫熒光復(fù)合染色顯示神經(jīng)元樹突軸突生長良好，且與普通培養(yǎng)板相比，絲素蛋白水凝膠在沒有PLL包被的情況下也能促進(jìn)神經(jīng)元貼附，證明了絲素蛋白水凝膠具有良好的生物相容性。4.免疫熒光結(jié)果分析顯示，在絲素蛋白凝膠材料上神經(jīng)元突起生長具有一定的取向性。
　　結(jié)論:目前在臨床上有關(guān)神經(jīng)損傷修復(fù)的方式尚存在不足，神經(jīng)組織工程給神經(jīng)再生帶來了新的研究方向。利用靜電相互作用來驅(qū)