金黃色葡萄球菌血漿凝固酶抗血清制備及ELISA檢測.pdf

1、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）在微生物分類學(xué)上屬于葡萄球菌屬，是革蘭氏陽性菌的代表，也是人類的一種重要病原微生物。金黃色葡萄球菌檢驗是藥品、保健品、化妝品、食品的重要檢驗項目。金黃色葡萄球菌檢驗，分為法定檢驗和快速篩選。法定檢驗常用標(biāo)準(zhǔn)都需以兔血漿進(jìn)行血漿凝固酶試驗確證結(jié)果，由于兔血漿質(zhì)量穩(wěn)定性和可控性較差，檢驗人員的視覺誤差，血漿凝固酶實驗常會發(fā)生假陰性和假陽性;開發(fā)ELISA檢測方法能提高血漿凝固酶實驗

2、的靈敏度和特異性，ELISA檢測方法也可直接用于金黃色葡萄球菌快速篩選。
　　論文研究以滅活的金黃色葡萄球菌為抗原免疫新西蘭大白兔，獲得了效價為1∶4000的血漿凝固酶兔抗血清;同時免疫豚鼠，獲得了效價為1∶2000的血漿凝固酶豚鼠抗血清。以兩種抗血清建立雙抗體夾心ELISA方法，優(yōu)化后ELISA實驗條件為:豚鼠抗血清作為包被抗體，兔抗血清作為檢測抗體，辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔抗體作為酶標(biāo)抗抗體，兔抗血清按1∶2000稀釋，豚鼠

3、抗血清按1∶1000稀釋，酶標(biāo)記的羊抗兔抗體按1∶5000稀釋。ELISA檢測方法的評價結(jié)果是:枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、志賀氏菌、沙門氏菌、白色念珠菌、黑曲霉用ELISA法檢測，均無顯著交叉反應(yīng)，特異性良好;ELISA檢測多個樣品組內(nèi)變異系數(shù)在7.4％～12.4％，組間變異系數(shù)在8.5％～14.2％，變異程度較小，重復(fù)性好;ELISA法用于血漿凝固酶檢測靈敏度高于兔血漿凝固法;ELISA法用于金黃色葡萄球菌快速檢測靈敏度