產前感染對新生大鼠肺發(fā)育的影響.pdf

1、目的：
　　產前感染引起母親全身炎癥，使中性粒細胞向胎膜及胎盤聚集，引發(fā)胎膜胎盤炎癥，即為絨毛膜羊膜炎。絨毛膜羊膜炎使羊水和臍血中炎癥介質水平增加，激活胎兒先天免疫系統(tǒng)，引起胎兒炎癥反應綜合征(fetal inflammatory responsesyndrome，F(xiàn)IRS)。FIRS的主要靶器官是胎肺，胎兒免疫系統(tǒng)激活后炎癥細胞和肺組織細胞能夠產生大量炎癥介質，其中IL-6是FIRS中的關鍵細胞因子，動物實驗和臨床研究均發(fā)現(xiàn)羊水

2、和臍血中IL-6水平升高與BPD相關，但IL-6如何影響肺發(fā)育尚不清楚。中性粒細胞能夠生成大量的活性氧物質，造成氧化應激，直接損傷肺組織。巨噬細胞不僅是促炎癥細胞因子的主要來源，還可能參與肺泡化抑制。髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)是中性粒細胞嗜天青顆粒中的一種酶，作為中性粒細胞分子標志物，而CD68是單核/巨噬細胞特異性表達的糖蛋白，作為巨噬細胞分子標志物。
　　本研究通過腹腔注射脂多糖(lipopolys

3、accharide，LPS)致孕晚期大鼠產前感染模型，分析產前炎癥對新生大鼠肺泡結構發(fā)育的影響及炎癥細胞、炎癥介質水平的變化，探討產前感染對新生大鼠肺發(fā)育的影響機制。
　　方法：
　　一、實驗動物模型建立
　　雌鼠受孕后隨機分為實驗組和對照組，分別于孕鼠孕19d和20d腹腔注射LPS2.5mg/kg和等量生理鹽水。
　　二、樣本收集
　　兩組孕鼠足月自然分娩后，于生后日齡1d、3d、7d、14d、21d及2

4、8d兩組各取8只新生鼠，10％水合氯醛溶液麻醉處死后，取左肺組織，于中性甲醛溶液固定，用于蘇木素-伊紅染色和免疫組織化學染色。
　　三、實驗方法
　　石蠟包塊常規(guī)切片4μm，行蘇木素-伊紅染色和免疫組化染色。光鏡下觀察，每張切片隨機選取8個視野，計數(shù)肺組織中以MPO為標志的中性粒細胞數(shù)和CD68為標志的巨噬細胞數(shù)量，圖像分析軟件測定肺泡數(shù)量，肺泡面積占組織面積比例，肺泡間隔厚度，并計算IL-6平均光密度以表示IL-6表達強度

5、。
　　四、統(tǒng)計學分析
　　采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行分析，所有研究結果以均數(shù)±標準差((x)±s)表示，兩組間數(shù)據(jù)比較使用獨立樣本t檢驗，多組間數(shù)據(jù)比較用單因素方差分析(one-way ANOVA)，同組內各時間點間互相比較采用最小顯著差異法（LSD檢驗），P＜0.05代表差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1、隨日齡增長，新生鼠肺泡數(shù)量增多、肺泡占組織面積比例逐漸增加，肺泡間隔厚度減小，IL-6表達逐漸

6、減弱，實驗組炎癥細胞數(shù)量逐漸減少。
　　2、日齡1d、3d、7d及14d，實驗組平均肺泡數(shù)量(88、89、102、127，單位:個/mm2)明顯少于同日齡對照組（105、109、123和156，單位:個/mm2），P分別為0.024、0.009、0.013和0.004。
　　3、日齡1d、3d和7d，實驗組肺泡占組織面積比例（0.552、0.603和0.533）明顯大于同日齡對照組（0.478、0.485和0.404），P分

7、別為0.003、0.001和0.000。
　　4、日齡1d及3d，實驗組肺泡間隔厚度（12.30和10.75，單位:μm）明顯小于同日齡對照組（17.13和16.13，單位:μm），P分別為0.000和0.000。
　　5、日齡1d、3d、7d及14d，實驗組中性粒細胞數(shù)量（681、582、393和379，單位:個/mm2）明顯多于同日齡對照組（164、211、145和179，單位:個/mm2），P分別為0.000、0.00

8、0、0.000及0.003。日齡1d、3d及7d，實驗組巨噬細胞數(shù)量（613、578和337，單位:個/mm2）明顯多于同日齡對照組（170、182和127，單位:個/mm2），P分別為0.000、0.000和0.000。
　　6、日齡1d、3d、7d，實驗組IL-6平均光密度(0.69，1.05，0.49)明顯大于同日齡對照組(0.34，0.30，0.33)，P分別為0.000，0.001，0.042。
　　結論：