下調血管生成素對人膀胱癌t24細胞增殖,凋亡的影響

1、<p>　　下調血管生成素對人膀胱癌T24細胞增殖、凋亡的影響</p><p>　　舒 靜，田文琳，李 林，劉玉林，陳俊霞 (400016 重慶，重慶醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院細胞生物學與遺傳學教研室，分子醫(yī)學與腫瘤研究中心)</p><p>　?。壅?目的 構建人血管生成素(angiogenin，ANG)基因siRNA干擾質粒，檢測其對膀胱癌T24細胞增殖、凋亡的影響。方

2、法 將針對人ANG基因siRNA表達質粒和無同源性的對照質粒穩(wěn)定轉染T24細胞后經(jīng)G418篩選出陽性克隆。根據(jù)轉染質粒不同分為3組：T24組(未轉染組)、T24-NC組(轉染陰性對照質粒組)、T24-siANG組(轉染干擾質粒組)。通過RT-PCR檢測T24細胞中ANG的mRNA表達水平，Western blot檢測ANG蛋白的表達；MTT法檢測細胞增殖活力；流式細胞術、TUNEL及Hochest(33342)檢測細胞凋亡；Wester

3、n blot檢測凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表達；構建移植瘤模型，組織HE染色和免疫熒光CD31檢測微血管變化；組織免疫化學方法檢測移植瘤中ANG、Bax、Caspase-3、Bcl-2的表達。結果 酶切和測序結果證明重組質粒構建成功；T24-siANG組ANG的mRNA水平及蛋白表達水平顯著降低（P＜0.05）；T24-siANG組細胞增殖活力明顯下降（P＜0.05）；流式細胞儀檢測結果顯示：與T2</p

4、><p>　?。坳P鍵詞］ 血管生成素；膀胱癌；增殖；凋亡</p><p>　　[中圖法分類號] [文獻標志碼] A</p><p>　　Effect of down-regulation human angiogenin on proliferation and apoptosis in h

5、uman bladder cancer T24 cells</p><p>　　Shu Jing ,Tian Wenlin, Li Lin ,Liu Yulin ,Chen Junxia (Dapartment of Cell Biology and Genetics ,Molecular Medicine and Cancer Research Center ,College of Basic Medical

6、Science ,Chongqing Medical University, Chongqing, 400016,China)</p><p>　　［Abstract］ Objective To determine the effects of down-regulation angiogenin on proliferation, apoptosis in human bladder cancer T24

7、cells. Methods One siRNA vectors specific to ANG gene and one non-homologous negative control were designed and constructed, then transfected into bladder cancer T24 cells with Lipofectamine 2000, and the positive clones

8、 were screened by G418, respectively, and were named as T24-siANG, T24-NC.T24 cells without transfection were named as control (T24 group). The ex</p><p>　?。跭ey words］ angiogenin; bladder cancer; proliferati

9、on ;apoptosis</p><p>　　Supported by the National Natural Science Foundation of China (81372203).Corresponding author: Chen Junxia, Tel:86-23-68485806, E-mail:chjunxia@126.com</p><p>　　血管生成素（angi

10、ogenin，ANG）是1985年由美國哈佛大學醫(yī)學院Fett等首次從人結腸腺癌HT-29細胞系培養(yǎng)基的上清中分離純化的小分子蛋白質。ANG是一種多功能的重要堿性分泌蛋白，與胰核糖核酸酶（pancreatic ribonucleases）的序列有35％的同源性，能激活胞外蛋白酶系統(tǒng)及介導細胞粘附、活化信號轉導通路，促進rRNA轉錄和核轉移［1］。研究表明［2］，ANG的表達和活性在前列腺癌、肺癌等多種惡性腫瘤中均有升高，然而目前通過下調

11、ANG的表達影響膀胱癌T24細胞凋亡的研究，國內外少見報道。</p><p>　　為了進一步探討ANG的功能，本實驗通過RNA干擾技術下調膀胱癌T24細胞ANG的表達，并探討ANG表達下調對凋亡關鍵蛋白（Bcl-2、Bax及Caspase-3）表達及細胞增殖、凋亡的影響，為膀胱癌的治療提供新的思路。</p><p><b>　　1 材料與方法</b></p>

12、;<p>　　1.1 主要試劑及動物</p><p>　　RPMI1640培養(yǎng)基、標準胎牛血清購于天津灝洋(TBD)公司；質粒抽提純化試劑盒、Trizol試劑盒、逆轉錄試劑盒、2×TaqMix、SalⅠ等購于大連寶生物公司；轉染試劑盒Lipofectamine 2000購于Invitrogen公司；TUNEL凋亡檢測試劑盒、Hochest33342試劑購自Biyotime生物技術公司；AN

13、G抗體（兔抗人）購自美國Santa Cruz公司；Bcl-2、Bax、Casepase-3、β-actin購自美國Bioworld公司；人膀胱癌細胞株T24、質粒pGenesil-1來自本實驗保存。BALB/c裸鼠4～6周，體質量（20±3）g，購于北京大學動物實驗中心。</p><p><b>　　1.2 方法</b></p><p>　　1.2.1 T

14、24-siANG干擾質粒的構建與鑒定 根據(jù)GenBank提供人ANG基因的cDNA序列（NM_001097577），應用Ambion在線軟件設計出小干擾RNA(siRNA)和一條與任何基因均無同源性的陰性對照組序列分別命名為T24-siANG1、T24-siANG2。T24-siANG1正義鏈：5′-GATCCGGAATGGAAACCCTCACAGATTCAAGAGATCTGTGAGGGTTTCCATTCTTTTTTGTCGACA

15、-3′,反義鏈：5′-AGCTTGTCGACAAAAAAGAATGGAAACCCTCACAGATCTCTTGAATCTGTGAGGGTTTCCATTCCG-3′；T24-siANG2陰性對照正義鏈：5′-GATCCGCGCAGAAAACGAGACACGAGATTCAAGAGATCTCGTGTCTCGTTTTCTGCGTTTTTTGTCGACA-3′，反義鏈：5′-AGCTTGTCGACAAAAAACGCAGAAAACGAGACACGAG

16、ATCTCTTGAATCTCGTGTCTCGTTTTCTGCGCG-3′。然后分別在上游5′和3′端引入</p><p>　　1.2.2 人膀胱癌T24細胞培養(yǎng)、轉染</p><p>　　1.2.2.1 細胞培養(yǎng) 用含10%的標準胎牛血清培養(yǎng)基培養(yǎng)（37℃、5%CO2）T24細胞。</p><p>　　1.2.2.2 細胞轉染與分組 取對數(shù)期細胞接種于6

17、孔板中培養(yǎng)，細胞數(shù)量達70%～80%用Lipofectamine 2000分別轉染不同的質粒到細胞。根據(jù)轉染質粒不同分別命名為T24細胞組(未轉染組)、T24-NC組(轉染陰性對照質粒組)、T24-siANG組(轉染干擾質粒組)。</p><p>　　1.2.3 篩選穩(wěn)定轉染ANG的細胞株 陰性對照質粒、干擾質粒轉染24h后傳代，48h后用400µg/mL G418篩選，14d后采用有限稀釋法挑選

18、綠色熒光團接種于24孔板培養(yǎng)和96孔板。10～14d后消化單克隆細胞團、擴大培養(yǎng)。</p><p>　　1.2.4 各組細胞ANG基因表達的檢測</p><p>　　1.2.4.1 RT-PCR檢測細胞ANG的mRNA表達水平 Trizol試劑盒提取各組細胞總mRNA，RT-PCR試劑盒檢測各組細胞ANG的表達量。ANG基因上游引物：5′-CAGCACTATGATGCCAAACC

19、AC-3′，下游引物：5′-GAAATGGAAGGCAAGGACAGC-3′；GAPDH基因上游引物：5′-GCTGTCCCTGTCGCCTCTG-3′，下游引物：5′-TGCCGATGGTGATGACCTGG-3′。反應條件：95℃預變形5min，95℃30s，60℃30s，72℃90s，30個循環(huán)。PCR產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳檢測后、凝膠成像儀顯影，Quantity One分析ANG與β-actin相對強度比值。</p>

20、;<p>　　1.2.4.2 Western blot 檢測ANG蛋白的表達 提取各組穩(wěn)定轉染細胞的總蛋白，經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳，濕轉至PVDF膜，5％脫脂奶粉封閉2h，一抗4℃孵育過夜（ANG 1∶100，β-actin 1∶2000）；HRP標記的羊抗兔（1∶2000）二抗常溫孵育2h，ECL發(fā)光顯色并進行ANG與β-actin相對強度的比值分析。</p><p>　　1.2.5

21、MTT檢測T24細胞的增殖 將對數(shù)期各組細胞，以2×103/孔接種于96孔培養(yǎng)板，每組設8個復孔進行常規(guī)培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)24、48、72、96、120h后，加MTT溶液20μL/孔并繼續(xù)培養(yǎng)4h，去除培養(yǎng)基，加150μL DMSO/孔，酶聯(lián)免疫檢測儀檢測490nm波長下各孔光密度值[D（490）]。細胞生長抑制率=[1-實驗組D（490）值/對照組D（490）值]×100％。</p><p&

22、gt;　　1.2.6 流式細胞儀檢測細胞凋亡 取對數(shù)生長期各組穩(wěn)定轉染的細胞，胰酶消化，PBS洗3次，70％乙醇4℃固定2h，流式細胞儀檢測細胞凋亡。</p><p>　　1.2.7 TUNEL檢測細胞凋亡 取對數(shù)生長期的各組細胞，每孔2×106 細胞接種于放有蓋玻片的6孔板，細胞融合度達70％，PBS洗3次，4％多聚甲醛固定1h，0.1％ Triton X-100 通透5 min；每組加入

23、50μL TUNEL檢測液，37℃避光孵育1h，PBS洗3次，甘油封片后熒光顯微鏡觀察拍照。</p><p>　　1.2.8 Hochest33342檢測細胞凋亡 各組以2×106細胞接種于放有蓋玻片的6孔板中，細胞融合度達70％，PBS洗3次，4％多聚甲醛固定1h，PBS洗3次，每個樣品孔加入150μL 按比例稀釋后的Hochest檢測液，37℃避光孵育30min，PBS洗3次，甘油封片后熒光顯

24、微鏡觀察拍照。</p><p>　　1.2.9 Western blot檢測細胞Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白的表達 蛋白裂解液提取各組細胞總蛋白，12％SDS-PAGE 凝膠電泳，常規(guī)濕法轉膜，5％脫脂奶粉封閉2h，一抗4℃孵育過夜[Bcl-2，Bax，Caspase-3（1∶150），β-actin（1∶2000）]；HRP標記的羊抗兔（1∶2000）二抗常溫孵育2h，ECL發(fā)光顯色并進行A

25、NG與β-actin相對強度的比值分析。</p><p>　　1.2.10 動物水平檢測下調ANG對T24細胞凋亡蛋白的影響</p><p>　　1.2.10.1 動物移植瘤模型 收集對數(shù)期細胞，用無血培養(yǎng)基制備2×107/mL 細胞懸液，分別皮下注射BALB/c裸鼠0.1 mL，每組8只。記錄各組腫瘤形成時間，6周后處死裸鼠，取腫瘤組織并固定于4％多聚甲醛溶液中。<

26、/p><p>　　1.2.10.2 HE染色 10%甲醛溶液固定腫瘤組織，5μm切片，二甲苯、梯度乙醇脫蠟至水，自來水沖洗，二甲苯和純酒精(1:1)混合液中浸泡5min，經(jīng)梯度酒精浸泡各5min，蘇木精染色3min，1%鹽酸酒精分色數(shù)秒，流水沖洗，蒸餾水清洗3次，伊紅染色3min，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察并拍照。</p><p>　　1.2.10.3 組織免疫

27、熒光檢測血管CD31 腫瘤組織經(jīng)冰凍切片后，4％多聚甲醛溶液固定15min，PBS洗3次，0.1％Triton X-100通透10min，PBS洗3次，0.03％雙氧水封閉內源性過氧化物酶20min，1％BSA封閉30min，一抗兔抗人（CD31 1∶100）4℃孵育過夜，PBS洗3次，滴加Fluorescein標記的羊抗兔二抗，37℃孵育30min，PBS洗3次，50％甘油封片，熒光顯微鏡觀察拍片。</p><

28、;p>　　1.2.10.4 免疫組織化學觀察各組移植瘤中ANG、Bax、Caspase-3及Bcl-2的表達 取固定于4％多聚甲醛溶液的腫瘤組織，石蠟包埋，5μm切片，二甲苯、梯度乙醇脫蠟至水，自來水沖洗，PBS洗3次，3％過氧化氫滅活過氧化物酶，PBS洗3次，枸櫞酸鈉修復抗原，PBS洗3次，5％羊血清封閉，一抗（ANG 1∶50，Caspase-3 1:200，Bax及Bcl-2均1:100）4℃孵育過夜，PBS洗3次，滴

29、加生物素化山羊抗兔，37℃孵育30min，PBS洗3次，滴加鏈霉素抗生素-過氧化物酶溶液37℃孵育20min，PBS洗3次，DAB顯色，復染，晾干，中性樹脂封片，觀察拍片。</p><p><b>　　1.3 統(tǒng)計學分析</b></p><p>　　采用SPSS 11.5軟件進行統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)以x±s表示，配對組間比較采用t檢驗、多組間比較采用方差分析。

30、</p><p><b>　　2 結果</b></p><p>　　2.1 ANG基因siRNA重組質粒酶切和測序鑒定</p><p>　　重組質粒被Sal Ⅰ單酶切為400bp與4400bp左右的2個片段，證明人ANG基因已成功插入到載體中；測序結果顯示，重組質粒的目的序列與設計的寡核苷酸序列一致，表明重組質粒鑒定正確。見圖1。</p&

31、gt;<p>　　M1 M2 1 2 3 4 5</p><p>　　M1:標準（10000bp ladder）；M2:標準（1000bp ladder）；1:pGenesil-1質粒；2：pGenesil-1 siRNA-1質粒；3：pGenesil-1 siRNA-1質粒酶切；4：pGenesil-1 siRNA-2陰性對照質粒；5：pGenesil-1 siRNA-

32、2陰性對照質粒酶切</p><p>　　圖1 酶切鑒定檢測結果</p><p>　　2.2 ANG siRNA 在各組T24細胞中的表達</p><p>　　2.2.1 T24細胞ANG mRNA的表達水平 與T24-NC組(0.75±0.04)和T24組(0.71±0.06)相比,T24-siANG 組(0.44±0.07)

33、細胞的ANG mRNA表達分別降低了41%和38%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而對照組間無明顯差異（P＞0.05）。見圖2。</p><p>　　M 1 2 3 4 5 6</p><p>　　M：標準（1000bp ladder）；1、2：T24-siANG組；3、4：T24-NC組；5、6：T24組；1、3、5：ANG mRNA；2、4、6：GAP

34、DH mRNA</p><p>　　圖2 RT-PCR檢測ANG mRNA的表達</p><p>　　2.2.2 T24細胞ANG蛋白表達 與T24-NC組和T24組相比，T24-siANG組的ANG蛋白表達降低了45%和49%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），而兩對照組間無明顯差異（P＞0.05）。見圖3。</p><p>　　1：T24-siANG組

35、；2：T24-NC組；3：T24組</p><p>　　圖3 Western blot 檢測各組細胞ANG蛋白的表達</p><p>　　2.3 各組細胞增殖活力的變化</p><p>　　T24-siANG細胞組的D（490）值于接種后第2天開始顯著低于T24-NC組和T24組（P＜0.05），接種48、72、96、120h，T24-siANG組細胞抑制率分別是

36、18％、27％、36％、42％，而對照組間無明顯差異（P＞0.05）。見圖4。</p><p>　　a：P＜0.05，與T24-NC 組和T24 組比較</p><p>　　圖4 MTT法檢測T24細胞生長增殖能力</p><p>　　2.4 各組細胞凋亡檢測結果</p><p>　　2.4.1 流式細胞儀檢測細胞凋亡 T24-siA

37、NG組有（30.23±15.81）％的凋亡細胞(P＜0.01)，而T24-NC組和T24細胞組僅有(5.44±3.09)％和(3.96±1.58)％的凋亡細胞，且兩對照間無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。見圖5。</p><p>　　2.4.2 TUNEL檢測細胞凋亡 T24-siANG細胞組出現(xiàn)大量帶高亮熒光的凋亡細胞，而T24、T24-NC組僅有少量凋亡細胞。見圖6。</

38、p><p>　　2.4.3 Hochest33342檢測細胞凋亡 T24-siANG 組出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)特征，如染色質凝集、核碎裂和明亮的藍色熒光，而T24-NC組和T24組沒有發(fā)現(xiàn)明顯凋亡特征。見圖7。</p><p>　　2.4.4 各組細胞中Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白的表達 T24-siANG組Bax、Caspase-3蛋白的表達，分別與T24-NC組和T

39、24組相比，升高了46％和51％（P＜0.01），37％和32％（P＜0.05）；T24-siANG組Bcl-2蛋白表達分別與T24-NC組和T24組相比，降低了38％和41％（P＜0.05），而兩對照間均無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。見圖8。</p><p>　　A：T24組；B：T24-NC組；C：T24-siANG組</p><p>　　圖5 流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率</

40、p><p>　　A：T24組；B：T24-NC組；C：T24-siANG組</p><p>　　圖6 TUNEL檢測各組細胞凋亡</p><p>　　A：T24組；B：T24-NC組；C：T24-siANG組</p><p>　　圖7 Hochest33342檢測各組細胞凋亡</p><p>　　A：Western bl

41、ot檢測結果；1：T24組；2：T24-NC組；3：T24-siANG組；B：半定量分析；a：P＜0.05，b：P＜0.01，與T24、T24-NC組比較</p><p>　　圖8 Western blot 檢測各組細胞Bax、Caspase-3和Bcl-2蛋白的表達</p><p>　　2.4.5 ANG基因表達下調對腫瘤微血管生成的影響 與T24-NC組（12.6±2

42、.8）相比，T24-siANG組（3.4±1.2）腫瘤血管生成顯著減少(P＜0.01)。見圖9。</p><p>　　2.4.5 免疫組化檢測移植瘤中ANG、Bax、Caspase-3及Bcl-2蛋白表達 與T24-NC組和T24組相比，T24-siANG組ANG蛋白表達明顯降低，凋亡標志性蛋白Bcl-2表達顯著降低，而Bax、Caspase-3蛋白明顯升高，與Western blot結果一致。見

43、圖10。</p><p><b>　　箭頭示腫瘤微血管</b></p><p>　　圖9 ANG基因表達下調對腫瘤微血管生成的影響</p><p>　　圖10 免疫組織化學觀察移植瘤中ANG、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表達</p><p><b>　　3 討論</b></

44、p><p>　　血管生成素（ANG）是一種促進新生血管內皮細胞生長的單鏈堿性蛋白，由123個氨基酸殘基組成，屬于核糖核酸酶超家族成員，具有弱Rnase活性，相對分子質量約為14.4×103，在體內外均具有強烈誘發(fā)血管生成的活性。研究發(fā)現(xiàn)[3-4]在不同類型的腫瘤細胞中血管生成素高表達，不僅與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、惡化密切相關，而且對血管內皮細胞遷移、增殖和血管的形成有廣泛的影響。Gao等[5-7]研究發(fā)現(xiàn)，AN

45、G可直接提高癌癥細胞(Hela細胞、PC-3細胞)的擴散，對血管的生成和腫瘤的擴散起雙重作用。體外實驗［8］證實：血管生成素可促進平滑肌細胞和血管內皮細胞的增殖、管腔形成。本研究通過RNA干擾技術，有效抑制ANG的mRNA和蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)沉默ANG表達可抑制細胞增殖活力，調節(jié)凋亡相關蛋白的表達，從而誘導T24細胞凋亡。流式細胞術和TUNEL檢測結果顯示：T24-siANG組細胞有大量的凋亡細胞，而T24-NC組和T24細胞組僅有少量的

46、凋亡細胞；Hochest檢測結果顯示：T24-siANG組出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)特征，而T24-NC組和T24組沒有發(fā)現(xiàn)明顯凋亡特征。</p><p>　　惡性腫瘤細胞的生長是異常增殖的結果，細胞的增殖和血管密度與腫瘤的生長密切相關，血管生成是腫瘤生長和轉移的必要條件，而檢測腫瘤血管微血管密度(MVD)一般采用CD31、CD34等泛血管內皮細胞標記物［9］。CD31屬于黏附分子免疫球蛋白超家族的主要成員，主要在血管內

47、皮細胞和血小板上表達。血小板與腫瘤細胞相互作用后釋放的活性物質，可激活腫瘤細胞與血管內皮細胞的結合，促使CD31黏附于腫瘤細胞和血管內皮細胞，在腫瘤的血管形成和轉移中發(fā)揮重要作用［10］。本實驗將siRNA ANG T24細胞及對照組細胞皮下注射到BALB/c裸鼠中，觀察腫瘤微血管密度的變化以及CD31在腫瘤組織中表達的變化。實驗結果顯示，ANG siRNA不僅明顯抑制了腫瘤細胞血管內皮細胞生長增殖，而且顯著降低了CD31的表達，這可能

48、進一步提示siRNA ANG 抑制了腫瘤血管的生成，阻礙膀胱癌T24細胞的轉移潛能，從而誘導細胞凋亡。同時大量實驗表明，ANG與CD31表達呈正相關，CD31表達的高低與腫瘤分級、浸潤和轉移密切相關，抑制ANG的表達能夠降低血管微血管的形成以及多種類型的腫瘤細胞轉移潛能［11］。</p><p>　　細胞凋亡是為了維持內環(huán)境的穩(wěn)定，涉及多基因參與與控制，引起細胞自主有序死亡的過程，主要以Bcl-2家族調控介導的凋

49、亡起主要作用，根據(jù)Bcl-2家族蛋白在細胞的作用劃分為兩類：一類為抗凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-xl）；另一類為促凋亡蛋白（如Bax、Bid）。文獻報道[12-14]，Bcl-2蛋白不僅與Bax結合形成異源二聚體阻斷細胞色素C的釋放，還引起細胞核谷胱甘肽的聚集和核內氧化還原平衡的改變，從而降低Caspase-3的活性，抑制下游Caspase-3的激活，達到有效抑制細胞凋亡的作用。此外研究發(fā)現(xiàn)[15-16]，異常表達的Bcl-2可以使

50、過度增生區(qū)及癌變區(qū)的細胞生命延長；而Bax蛋白通過與線粒體膜直接結合，釋放細胞色素C，促進細胞凋亡。Walensky等［17］研究發(fā)現(xiàn)：當下調Bax基因表達時，會導致細胞生存時間延長，促使突變的積累，有利于腫瘤的生長、轉移及侵襲。本研究發(fā)現(xiàn)ANG表達被沉默后，抑制Bcl-2的表達，使Bax表達顯著升高，從而誘導細胞凋亡。</p><p>　　Caspase-3屬于ICE蛋白酶家族，即含半谷氨酸的天冬氨酸特異水解酶

51、。一方面，在正常細胞中Caspase-3以無活性的Caspase-3酶原（pro-Caspase-3）的形式存在，只有當細胞發(fā)生凋亡時，才具有活性［18］；另一方面Caspase-3還可水解Bcl-2，誘導細胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)［19-21］：細胞凋亡過程實際是Caspase不可逆有限水解底物的級聯(lián)放大反應的過程，如同凝血因子一樣“瀑布式”層層激活；而啟動后的Caspase即可開啟細胞的死亡程序，以異源活化方式水解下游蛋白（如Caspase

52、-3，6）并放大凋亡信號，促進細胞凋亡。本研究結果顯示，敲除ANG基因可使活化的Caspase-3表達顯著升高，促進細胞凋亡。腫瘤的異種移植模型表明，ANG表達下調降低了腫瘤組織中Bcl-2表達，而增高了Bax、Caspase-3表達，這可能進一步提示siRNA ANG 促進了膀胱癌T24細胞的凋亡。</p><p>　　綜上所述，體內外實驗證明：ANG基因與膀胱癌細胞的生長、增殖及血管的形成有著密切的聯(lián)系。下調

53、ANG的表達，可抑制膀胱癌T24細胞的增殖活力和微血管生成，調節(jié)凋亡關鍵蛋白（Bcl-2、Bax及Caspase-3）的表達，從而誘導細胞凋亡。為進一步研究ANG的生物學功能和其調節(jié)細胞增殖和凋亡的分子機制提供實驗依據(jù)。</p><p><b>　　參考文獻：</b></p><p>　　［1］Xu Z, Monti D M, Hu G. Angiogenin act

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