雙納米金復(fù)合探針蛋白芯片在心臟標(biāo)志物檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、背景：
　　急性心肌梗死(Acute myocardial infarction，AMI)是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ê?jiǎn)稱冠心?。┑膰?yán)重類型，其診斷主要依靠臨床表現(xiàn)、心電圖改變及心臟標(biāo)志物的測(cè)定。目前，因胸痛或其他不適疑似急性冠脈綜合癥（acute coronary syndrome，ACS）的患者因缺乏典型癥狀，或急救現(xiàn)場(chǎng)缺乏心電圖、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)條件等原因，錯(cuò)失了最佳治療時(shí)機(jī)，給疾病的診治篩查帶來(lái)了眾多不便。及時(shí)檢測(cè)生物傳感器技術(shù)

2、，由于便攜式、低成本、高靈敏、簡(jiǎn)便快捷等優(yōu)點(diǎn)目前廣泛應(yīng)用于心臟標(biāo)志物的聯(lián)合檢測(cè)，在心血管疾病早期診斷中具有廣闊的應(yīng)用前景。
　　納米金（gold nanoparticles，AuNPs）為直徑介于1nm至100nm的金微小顆粒。因其能夠穩(wěn)定存在于水溶液中，又名膠體金。作為一種新型的納米材料之一，納米金由于具有特殊的物理、化學(xué)性質(zhì)廣泛應(yīng)用于許多領(lǐng)域，包括生物傳感器、免疫分析、基因組學(xué)、蛋白質(zhì)及藥物的靶向傳遞、組織和細(xì)胞探測(cè)系統(tǒng)的光學(xué)

3、成像、腫瘤細(xì)胞的光熱作用等方面。
　　隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的提出及研究的不斷深入，蛋白芯片技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，以實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)的大規(guī)模分析。蛋白芯片，又名蛋白微陣列芯片（protein chip or protein microarray)，由包被在各種各樣固相基質(zhì)的蛋白微陣列組成，憑借高通量、微型化、高靈敏度和高特異性等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)相互作用譜和表達(dá)譜的系統(tǒng)性研究中，為蛋白組學(xué)的發(fā)展提供了新的技術(shù)方法和研究策略。
　　目的：

4、r>　　為實(shí)現(xiàn)AMI的快速、高靈敏、高特異性、聯(lián)合定量檢測(cè)，本文構(gòu)建了一種基于雙納米金復(fù)合探針蛋白芯片檢測(cè)心肌損傷標(biāo)志物的新方法。
　　方法：
　　本研究構(gòu)建了兩種納米金探針：標(biāo)記檢測(cè)抗體和DNA探針1的檢測(cè)探針和標(biāo)記DNA探針2（與DNA探針1堿基互補(bǔ)配對(duì)）的信號(hào)探針。當(dāng)目的抗原存在時(shí)，檢測(cè)探針經(jīng)檢測(cè)抗體、抗原，與芯片上捕獲抗體結(jié)合，固定在芯片上；信號(hào)探針通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與檢測(cè)探針結(jié)合使信號(hào)放大，最后利用納米金成核原理染色

5、，通過(guò)顯微鏡觀察結(jié)果并定量分析，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；收集2014年03月至12月就診于鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院和鄭州市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科的72例住院患者血清，其中不穩(wěn)定性心絞痛(UA)30例，AMI42例，對(duì)照組為健康體檢者30例。分別用該方法與臨床電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)以上三組患者血清中肌鈣蛋白I(cTnI)、肌紅蛋白（MYO）以及心型脂肪酸結(jié)合蛋白(HFABP)的含量。
　　結(jié)果：
　　該體系

6、40min內(nèi)可檢測(cè)多種標(biāo)志物，其中肌鈣蛋白I(cTnI)檢測(cè)限為10 pg/mL，與臨床電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）靈敏度相當(dāng)；肌紅蛋白（MYO）與心型脂肪酸結(jié)合蛋白(HFABP)檢測(cè)限分別為640 pg/mL和10 pg/mL，與ECLIA及酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）相比，靈敏度顯著提高。本方法檢測(cè)臨床樣本與ECLIA、ELISA結(jié)果總體一致。
　　結(jié)論：
　　該蛋白芯片技術(shù)簡(jiǎn)便快捷、成本低、可同時(shí)高靈敏檢測(cè)多種標(biāo)志物，在