阿霉素對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞ABCG2、P-gp、ERCC1蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、背景和目的:乳腺癌是我國女性患者常見的惡性腫瘤，特別是三陰性乳腺癌（TNBC），因其治療效果較差，嚴(yán)重威脅患者的生命健康。阿霉素是臨床上治療乳腺癌常用的化療藥物，但有部分患者在臨床治療中或治療后出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，并且對(duì)其他化療藥物也容易產(chǎn)生耐藥性。如何克服化療藥物耐藥是目前TNBC治療的難點(diǎn)。
　　ATP結(jié)合盒(ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族是一類在體內(nèi)廣泛分布的跨膜蛋白，包括P-糖蛋白(P-gp/ABCB1)、三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白

2、G超家族成員2(ABCG2)等。該蛋白家族的主要功能是通過水解ATP產(chǎn)生的能量驅(qū)動(dòng)結(jié)合底物（藥物、代謝物和其他化合物）的跨細(xì)胞膜運(yùn)輸。因此它們能夠幫助癌細(xì)胞保護(hù)自身不受細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑的傷害，在腫瘤耐藥中扮演著重要角色，是決定化療是否能夠取得成功的關(guān)鍵。因此為了探討阿霉素對(duì)TNBC患者治療后產(chǎn)生耐藥的機(jī)制，本課題選擇MDA-MB-231細(xì)胞株為研究對(duì)象，采用合適濃度的阿霉素處理該細(xì)胞，采用多種方法分析存留細(xì)胞中ABCG2、P-gp和ERC

3、C1的表達(dá)情況，以及對(duì)其他化療藥物的耐受情況。初步分析乳腺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素及其他化療藥物產(chǎn)生抵抗的可能機(jī)制。
　　方法:首先選擇合適濃度的阿霉素體外處理MDA-MB-231細(xì)胞株，選擇處理后存留細(xì)胞為研究對(duì)象，采用CCK-8法測(cè)定并計(jì)算該細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥程度，采用Western blot檢測(cè)ABCG2、P-gp、ERCC1蛋白在經(jīng)阿霉素干預(yù)后在MDA-MB-231細(xì)胞中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.阿霉素對(duì)MDA-M

4、B-231細(xì)胞的抑制率呈劑量依賴性效應(yīng)，即隨著阿霉素濃度的增高，對(duì)該乳腺癌細(xì)胞的抑制率也不斷增加。計(jì)算出阿霉素對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的IC50為1.25μg/ml，選擇1/2IC50濃度作為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。
　　2.選擇存留細(xì)胞，采用CCK-8的方法檢測(cè)該細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥程度。結(jié)果顯示，隨著阿霉素干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)，該細(xì)胞對(duì)順鉑產(chǎn)生一定的抵抗。
　　3.Western blot結(jié)果顯示，經(jīng)阿霉素干預(yù)8h及24h后的細(xì)胞