HB-EGF對(duì)肝癌細(xì)胞遷移的影響機(jī)制及TNFR2基因多態(tài)性與HBV相關(guān)性肝病遺傳易感性的研究.pdf

1、目的:
　　1.從體外實(shí)驗(yàn)觀察HB-EGF對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC7721遷移的影響，并以FAK為靶點(diǎn)，研究HB-EGF對(duì)FAK信號(hào)通路的影響。
　　2.通過(guò)對(duì)腫瘤壞死因子受體Ⅱ基因rs1061622和rs1061624兩個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性的研究，在廣西人群中探討TNFR2基因與乙型肝炎、肝硬化、肝癌的遺傳易感性。
　　方法:
　　1.Transwell遷移試驗(yàn)評(píng)價(jià)不同濃度HB-EGF對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC7721遷移能力

2、的影響;采用Western Blot技術(shù)分析HB-EGF對(duì)FAK的表達(dá)及磷酸化水平的影響。
　　2.收集廣西115例肝炎患者、86例肝硬化患者、272例肝癌患者和269例健康體檢者，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法檢測(cè)TNFR2兩個(gè)位點(diǎn)的基因型。應(yīng)用SPSS16.0對(duì)資料進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料的比較采用卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料的比較采用t檢驗(yàn)，Logistic回歸模型計(jì)算相對(duì)危險(xiǎn)度并校正混雜因素。
　　結(jié)

3、果:
　　1.Transwell遷移試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HB-EGF對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721有趨化遷移的作用，當(dāng)HB-EGF濃度為10ng/mL時(shí)，肝癌細(xì)胞的遷移率最大。WestemBlot實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):HB-EGF可以促進(jìn)FAK(Tyr397)的磷酸化，和FAK蛋白表達(dá)水平。FAK抑制劑FAKI-14能夠明顯阻斷HB-EGF誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的遷移。
　　2.rs1061622位點(diǎn)共有TT、TG、GG三種基因型，各基因型及等位基因在

4、CHB組、LC組和HCC組中分布頻率的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，提示rs1061622基因多態(tài)性可能與CHB、LC和HCC的患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)相關(guān)性。rs1061624位點(diǎn)共有GG、GA、AA三種基因型，AA基因型可增加CHB和LC的患病風(fēng)險(xiǎn)(P=0.026，OR=2.666，95％CI=1.126-6.316;P=0.027，OR=2.947，95％CI=1.130-7.689)，GA基因型可增加HCC的患病風(fēng)險(xiǎn)(P=0.046，O

5、R1.563,95％CI=1.009-2.422)。
　　3.我們?cè)谛詣e分層分析中發(fā)現(xiàn):在男性人群中，rs1061624位點(diǎn)hA基因型患CHB和LC的風(fēng)險(xiǎn)分別是GG基因型的4.280倍和3.361倍(P=0.011，95％CI=1.405-13.041; P=0.031，95％CI=1.114-10.146)，A等位基因患CHB的風(fēng)險(xiǎn)是G等位基因的1.668倍(P=0.028，95％CI=1.056-2.634)。
　　4.

6、我們?cè)谀挲g分層分析中發(fā)現(xiàn):在年齡＜50歲人群中，rs1061624位點(diǎn)AA基因型患CHB和LC的風(fēng)險(xiǎn)是GG基因型的3.000倍和5.694(P=0.029，95％CI=1.122-8.027;P=0.017，95％CI=1.367-23.717)，GA基因型患LC的風(fēng)險(xiǎn)是GG基因型的2.712倍(P=0.046，95％CI=1.019-7.216)。A等位基因患LC的風(fēng)險(xiǎn)是G等位基因的1.719倍(P=0.036，95％CI=1.036

7、-2.854)
　　5.在吸煙分層分析中發(fā)現(xiàn):在非吸煙人群中，rs1061624位點(diǎn)AA基因型患LC的風(fēng)險(xiǎn)是GG基因型的3.855倍（P=0.032，95％CI=1.122-13.239）。
　　6.在飲酒分層分析中發(fā)現(xiàn):在飲酒人群中，rs1061624位點(diǎn)hA基因型患CHB的風(fēng)險(xiǎn)是GG基因型的6.096倍。
　　7.在民族分層分析中發(fā)現(xiàn):在漢族人群中，rs1061624 A等位基因患HCC的風(fēng)險(xiǎn)是G等位基因的1.49

8、7倍（P=0.044，95％CI=1.011-2.216）;AA基因型可增加CHB和HCC的患病風(fēng)險(xiǎn)(P=0.021，OR=3.969，95％CI=1.235-12.752; P=0.031, OR=3.390,95％CI=1.120-10.263), GA基因型可增加HCC及LC的患病風(fēng)險(xiǎn)(P=0.035，OR=1.975，95％CI=1.048-3.722;P=0.034, OR=2.706,95％CI=1.077-6.800)。<

9、br>　　結(jié)論:
　　1.HB-EGF通過(guò)FAK途徑影響肝癌細(xì)胞的遷移。
　　2.TNFR2rs1061622位點(diǎn)基因多態(tài)性與HBV相關(guān)性肝炎、肝癌、肝硬化的患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)。
　　3.TNFR2 rs1061624位點(diǎn)的AA基因型與HBV相關(guān)性肝炎、肝硬化的患病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)，可能是HBV相關(guān)性肝炎、肝硬化的危險(xiǎn)因素;GA基因型與肝癌患病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)，可能是肝癌的一個(gè)危險(xiǎn)因素。
　　4.分層分析中發(fā)現(xiàn)rs1061624位點(diǎn)的