馬爾尼菲青霉菌及其胞漿酵母抗原對BALB-c小鼠肺泡巨噬細(xì)胞極化的影響.pdf

1、目的：探討馬爾尼菲青霉菌（Penicillium marneffei,PM）及其胞漿酵母抗原（cytoplasmicyeast antigen，CYA）對BALB/c小鼠肺泡巨噬細(xì)胞極化的影響。
　　方法：150只5-6周齡雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分為空白組（N）30只，感染2周組（PM-2W）60只，感染4周組(PM-4W)60只。感染組小鼠由鼻腔滴入50μL濃度為5×107 CFU/ml的馬爾尼菲青霉菌孢子懸液分別飼養(yǎng)2周或者

2、4周；空白組小鼠不做任何處理。麻醉處死各組小鼠獲取肺泡巨噬細(xì)胞（AMs）以1×106/孔的濃度種植于12孔板里培養(yǎng)24小時(shí)后收集細(xì)胞上清液及細(xì)胞沉淀，通過實(shí)時(shí)定量熒光PCR（qRT-PCR）檢測巨噬細(xì)胞精氨酸途徑關(guān)鍵酶:誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶inducible nitric oxide synthase(iNOS)和精氨酸酶Arginase1(Arg1)mRNA表達(dá)水平；一氧化氮（NO）檢測試劑盒及Arg1活性檢測法檢測精氨酸途徑產(chǎn)物NO

3、及尿素（urea）的生成；ELISA試劑盒檢測細(xì)胞上清液中的細(xì)胞因子IL-12、TNF-α、IL-10、TGF-β的濃度來鑒定馬爾尼菲青霉菌對巨噬細(xì)胞極化的影響。將感染組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞分為PM-control組（空白對照組），PM-LPS+IFN-γ刺激組（M1陽性對照組），PM-IL-4刺激組（M2陽性對照組），PM-CYA刺激組，加入以上介質(zhì)后共培養(yǎng)24小時(shí)收集細(xì)胞上清液及細(xì)胞沉淀，同樣的方法檢測以上指標(biāo)來鑒定CYA對感染小鼠肺泡

4、巨噬細(xì)胞極化的影響。
　　結(jié)果：⑴PM感染2周組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞與空白組比較，表達(dá)的M1型標(biāo)志（iNOSmRNA、NO、IL-12、TNF-α）和M2型標(biāo)志（Arg1mRNA、urea）的水平更高（P<0.05），但是不能促進(jìn)M2相關(guān)細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)，各組IL-10的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。以上指標(biāo)在感染2周時(shí)表達(dá)更為明顯，感染4周時(shí)已明顯下降（P<0.05）。各組均未檢測到M2相關(guān)細(xì)胞因子TGF-β的表達(dá)。⑵P

5、M感染小鼠2周時(shí)，PM-CYA組的肺泡巨噬細(xì)胞與PM-control組和M1陽性對照組比較高表達(dá)M1型標(biāo)志iNOSmRNA、NO、IL-12(P<0.05)；與PM-control組比較高表達(dá)M2型標(biāo)志Arg1mRNA、urea(P<0.05)，但是比M2陽性對照組表達(dá)水平低(P<0.05)。PM-CYA組不能促進(jìn)IL-10的表達(dá)，各組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。各組均未檢測到TGF-β的表達(dá)。PM-CYA組誘導(dǎo)M1表型的表達(dá)比M2表