碘缺乏對Balb-c小鼠促甲狀腺激素β剪接變體基因表達的影響.pdf

1、2009年Vincent BH等人報告小鼠BM細胞表達功能性TSHβ剪接變體(TSHβsplice variant，TSHβ-V)，在病毒感染時甲狀腺中TSHβ-V mRNA表達增加7倍，而天然型TSHβ mRNA表達無改變。同年Schaefer等人報道人類也存在與小鼠類似的TSHβ剪接變體mRNA表達。TSHβ-V對甲狀腺激素合成是刺激還是抑制、是否受甲狀腺激素的負反饋調(diào)節(jié)尚不明確，因此我們制備碘缺乏小鼠模型，通過檢測TSHβ剪接變體

2、在BM、PBL、甲狀腺及垂體中的表達情況，驗證TSHβ剪接變體是否受循環(huán)中甲狀腺激素的調(diào)節(jié)，探討免疫系統(tǒng)來源的TSHβ-V在維持甲狀腺自穩(wěn)態(tài)中的作用。
　　單羧酸轉運體8(monocarboxylate transporter8，MCT8)是小鼠甲狀腺分泌TH入血的重要的TH轉運體，MCT8-KO小鼠血清T4降低除了因為5’脫碘作用增強導致的消耗效應所致，還與TH從甲狀腺分泌TH有缺陷有關。我們檢測了不同TH水平下甲狀腺MCT8的

3、表達情況，以了解TH對甲狀腺MCT8表達的影響，進一步探討MCT8在甲狀腺分泌TH過程中的作用。
　　方法：
　　本實驗選用離乳Balb/c小鼠，雌雄各半。小鼠按體重和性別隨機分為2組。正常對照組(NC組)：65只，飲去離子水，普通飼料喂養(yǎng)；低碘組(LI組)：65只，飲去離子水，低碘飼料(含碘量20-40μg/kg)喂養(yǎng)，每日碘攝入量約為0.25μg/d。飼養(yǎng)3個月時每組處死10只，其余小鼠繼續(xù)喂養(yǎng)3個月。飼養(yǎng)6個月時，LI

4、組中取15只小鼠細分為3組(每組5只)，分別給予注射T3(100μg/kg，每日一次)24h、48h、72h，處死全部小鼠。
　　用化學發(fā)光免疫分析法(CIA)檢測小鼠血清中TSH和TH水平，SYBRGREEN實時熒光定量(RT)-PCR法檢測小鼠BM、PBL、甲狀腺和垂體中TSHβ-VmRNA及甲狀腺MCT8mRNA的表達情況，Western blot法檢測甲狀腺MCT8蛋白的表達。
　　結果：
　　低碘飲食飼養(yǎng)3個

5、月，LI組小鼠血清TT4、TT3、FT4、FT3[(0.47±0.70)nmol/L、(2.41±0.28)pmol/L、(0.76±0.08)nmol/L、(4.01±0.40)pmol/L]顯著低于NC組小鼠[(55.2±3.68)nmol/L、(32.72±1.02)pmol/L、(1.10±0.06)nmol/L、(5.40±0.38)pmol/L，P<0.001]；LI組小鼠TSH(35.67±17.39)mIU/L明顯高于N

6、C組(0.24±0.105)mIU/L，P<0.001；LI組BM、PBL TSHβ-V mRNA(0.0014±0.0006、0.0019±0.0011)表達均低于NC組(0.0050±0.0005、0.0075±0.0021，P<0.05)；與NC組(0.0019±0.0006)相比，LI組甲狀腺TSHβ-V mRNA表達(0.0018±0.0005)沒有顯著變化，P>0.05；在BM、PBL、甲狀腺未檢出天然型TSHβ；垂體中TS

7、Hβ-V mRNA和天然型TSHβ表達水平(0.2704±0.1044、108.1017±8.9426)均高于NC組(0.0219±0.0426、2.8331±0.9199，P<0.05)。
　　低碘飼養(yǎng)6個月，LI組小鼠血清TT4、FT4[(4.60±2.62)nmol/L、(4.72±0.78)pmol/L]顯著低于NC組小鼠[(46.74±10.22)nmol/L、(28.80±4.81)pmol/L，P<0.001]；與N

8、C組小鼠[(0.92±0.15)nmol/L、(4.59±0.34)pmol/L]相比，TT3、FT3[(1.02±0.21)nmol/L、(5.23±0.87)pmol/L]差異無統(tǒng)計學意義；LI組小鼠TSH(3.22±4.68)mIU/L明顯高于NC組(0.08±0.03)mIU/L，P<0.001；LI組BM，PBL TSHβ-V mRNA(0.0021±0.0010、0.0432±0.0149)表達均稍高于NC組(0.0015±

9、0.0014、0.0366±0.0214)，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與NC組(0.0014±0.0007)相比，LI組甲狀腺TSHβ-V mRNA表達(0.0003±0.0003)下調(diào)，P<0.05；在BM、PBL、甲狀腺未檢出天然型TSHβ；垂體中TSHβ-V mRNA和天然型TSHβ表達水平[(1.5851±0.1979)、(29.7621±4.9983)]均高于NC組(0.5709±0.0430、1.1996±0.38

10、49，P<0.05)。
　　注射T3后TT4，TT3，F(xiàn)T4，F(xiàn)T3逐漸上升，24h開始高于LI組，48h恢復到NC水平，72h高于NC組水平。TSH在24h(2.44±2.60)就回落到了NC組水平(0.08±0.03)，P=0.074。注射T324h、48h、72h，甲狀腺中TSHβ-V mRNA表達水平仍處于下調(diào)狀態(tài)。垂體中48h(0.4129±0.0884)開始TSHβ-V mRNA表達下調(diào)NNC水平，但與LI組相比3個時

11、間點的表達均下調(diào)(P<0.05)。天然型TSHβ表達水平也在48h(0.9117±0.2613)開始恢復到NC組水平。
　　低碘飼養(yǎng)3個月，與NC組(0.6223±0.1570)相比，LI組甲狀腺MCT8 mRNA(1.5201±0.2969)表達量明顯上調(diào)(P<0.05)。低碘飼養(yǎng)6個月時，與NC組(0.2282±0.0582)相比，LI組甲狀腺MCT8 mRNA(0.6254±0.2872)表達量明顯上調(diào)(P<0.05)，We

12、sten blot方法檢測MCT8蛋白得到一致的結果。低碘飼養(yǎng)6月注射T324h、48h、72h后，與LI組(0.6254±0.2872)相比，24h(0.2900±0.0506)、48h(0.2438±0.0914)、72h(0.1402±0.0526)甲狀腺MCT8 mRNA明顯下調(diào)，P<0.05；與NC組(0.2282±0.0582)相比，甲狀腺MCT8 mRNA
　　結論：
　　1、低碘飲食，甲狀腺激素合成原料不足，

13、3個月時TT4、TT3、FT4、FT3均明顯下降，TSH明顯升高。6個月時，機體有所代償，TT3、FT3恢復正常，但TT4、FT4仍明顯下降，TSH仍明顯升高。注射T3后，TT4、TT3、FT4、FT3均穩(wěn)步上升，TSH逐漸下降，為經(jīng)典的HPT軸調(diào)控。
　　2、3個月時，甲狀腺激素不足，BM、PBL中TSHβ-V mRNA的表達下調(diào)。6個月時，機體代償，TT3、FT3恢復，BM、PBL中TSHβ-V mRNA的表達有所升高。3個月

14、和6個月BM，PBL中的TSHβ-V表達量不同可能與甲狀腺激素不足，影響B(tài)M、PBL中細胞的增殖和分化有關。
　　3、3個月時，甲狀腺激素不足，甲狀腺中TSHβ-V mRNA的表達下調(diào)。6個月時，機體代償，TT3、FT3恢復，但甲狀腺內(nèi)TSHβ-V mRNA的表達水平仍處于下調(diào)狀態(tài)。6個月時甲狀腺TSHβ-V表達下降，而垂體TSHβ表達量增加，提示TSHβ-V可能抑制甲狀腺功能。注射T3以后，甲狀腺TSHβ-V mRNA表達沒有變