基于殼聚糖三氧化二砷肝靶向載體的研究.pdf

1、三氧化二砷(As2O3)是中藥砒霜的主要有效成分，不僅對急性早幼粒白血病療效顯著，對實體瘤也有著較好的抑制作用。然而As2O3在體內(nèi)半衰期較短，給藥后會被快速清除;此外高劑量的As2O3對肝腎衰竭等毒副作用，限制了其在臨床上的應用。因此我們考慮構建三氧化二砷肝靶向藥物體系，使As2O3能夠直接靶向肝癌腫瘤部位并在腫瘤細胞內(nèi)部實現(xiàn)藥物的釋放，提高治療效果。
　　本文首先將聚乙二醇(PEG)及乳糖酸(LA)通過共價偶聯(lián)的方法接枝到具有

2、較好生物相容性、可生物降解、無毒的天然聚陽離子化合物殼聚糖(CS)上，制備可靶向肝癌腫瘤細胞且能夠躲避被單核巨噬系統(tǒng)(MPS)清除的正電荷材料PEG/LA-CS(PLC)。采用紅外光譜(FTIR)和元素分析對PLC結(jié)構進行分析，結(jié)果表明mPEG、LA可成功接枝到殼聚糖上，接枝率為11.73％。采用穩(wěn)定熒光光譜及透射電鏡(TEM)對PLC的自聚集行為進行考察;采用電化學阻抗頻譜圖(EIS)考察PLC對BSA的吸附作用，表明PLC對BSA的

3、吸附量較少。同時采用熒光光譜、紫外光譜(UV)及圓二色光譜(CD)考察PLC對BSA蛋白結(jié)構的影響，所有數(shù)據(jù)都說明BSA在PLC溶液中的蛋白結(jié)構不發(fā)生改變。此外，PLC具有較好的血液相容性，可有效延遲血漿復鈣時間40％以上，抗凝血性能良好，溶血率小于5％，符合生物醫(yī)用高分子材料的使用要求。
　　選擇可生物降解、細胞相容性良好的聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)作為藥物載體材料，通過雙乳化-溶劑揮發(fā)法(W/O/W)將藥物As2O3包

4、封到PLGA納米粒內(nèi)部，制備肝腫瘤靶向As2O3-PLGA/PLC藥物緩釋納米粒。采用正交實驗系統(tǒng)考察實驗過程中多個實驗因素對納米粒合成的影響。通過對實驗結(jié)果的綜合分析，得到的最優(yōu)實驗條件為:內(nèi)外相油水比為20∶1;PLGA濃度為30 mg/mL;PLC濃度為1 mg/mL;乳化劑(Poloxamer)濃度為9％(w/v)。優(yōu)化所得到的As2O3-PLGA/PLC納米粒粒徑為187.2±10.6 nm，分散系數(shù)(PDI)為0.197±0

5、.008，電位為28.9±0.3 mV，包封率達91.68％±1.42％，載藥量為72.0±1.24％,在5天內(nèi)對藥物的釋放可達72.83％。
　　為了了解As2O3-PLGA/PLC NPs的抗腫瘤性能，對納米粒的體內(nèi)抗腫瘤性能和體外抗腫瘤性能分別進行研究。使用CCK-8法考察納米粒對肝細胞LO2和肝癌細胞SMMC-7721的抑制作用。結(jié)果表明，As2O3-PLGA/PLC NPs對SMMC-7721細胞具有明顯的抑制作用，并且

6、該抑制作用依賴于時間和藥物濃度，隨時間的延長及藥物濃度的增大，抑制效果增強，作用72h后藥物的半抑制濃度IC50為0.47±0.017μg As2O3/mL，遠低于純As2O3制劑(0.96±0.033μg As2O3/mL)。同時我們選擇HEPG-2細胞注射雄性BALB/c裸鼠腋區(qū)皮下建立動物腫瘤模型考察As2O3-PLGA/PLC NPs體內(nèi)抗腫瘤性能。數(shù)據(jù)表明，As2O3-PLGA/PLC NPs能夠抑制腫瘤的生長，在一個試驗周期