版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、背景和目的:一直認為,流感病毒感染的初始階段是其外殼上的血凝素(Hemagglutinin,HA)結合到宿主細胞膜上的唾液酸受體再引發(fā)一系列入胞過程,其中包括巨胞飲途徑。而細胞內(nèi)SNX5蛋白又與巨胞飲有關。唾液酸受體的多樣性決定了病毒感染的特異性,人流感病毒結合α-2,6唾液酸受體,可通過植物凝集素SNA染色辨別。而禽流感表達則結合α-2,3唾液酸受體,被植物凝集素MAAI、MAAII染色辨別。人流感病毒能否感染只存在禽流感病毒受體的C
2、HO-K1細胞,以及SNX5是否能夠與巨胞飲介導的病毒感染過程有關還有待確定。因此,本研究將針對這兩個問題進行相關研究。
材料與方法:
1.唾液酸受體表達研究:將三種植物凝集素SNA、MAAⅠ和MAAⅡ分別與CHO-K1細胞孵育過夜,經(jīng)辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素結合后,AEC顯色。
2.siRNA下調(diào)SNX5效率的檢測:設計RNA干擾序列,將干擾試劑與CHO-K1細胞共孵育一段時間后利用實時定量PCR和
3、免疫蛋白印跡檢測SNX5下調(diào)情況。
3.吞噬實驗:將FITC標記的右旋糖酐與SNX5下調(diào)后的CHO-K1細胞共孵育一段時間后利用流式細胞術檢測內(nèi)吞顆粒。
4.免疫熒光檢測CHO-K1細胞內(nèi)SNX5蛋白與病毒分布情況:將CHO-K1細胞與SNX5蛋白流感病毒NP蛋白抗體孵育,用已感染的CHO-K1細胞爬片進行免疫熒光檢測,觀察細胞SNX5蛋白與流感病毒在細胞內(nèi)的定位。
5.免疫熒光檢測CHO-K1細胞吞噬的F
4、ITC-Dextran與感染的病毒分布情況:在流感病毒感染CHO-K1細胞時同時加入FITC-Dextran,用已感染的CHO-K1細胞爬片進行免疫熒光檢測,觀察細胞吞噬的右旋糖酐與流感病毒在細胞內(nèi)的定位。
6.人流感病毒感染CHO-K1細胞:使用的病毒為A/Nanchang/8002/2009(H1N1),設置不同時間段收取細胞,進行后續(xù)實驗檢測,以了解病毒復制感染情況。
7.人流感病毒基因復制檢測:CHO-K1細
5、胞感染后,提取其總RNA,進行反轉(zhuǎn)錄后,進行先提取感染后的CHO-K1細胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄后使用熒光定量PCR的方法檢測人流感病毒保守基因基質(zhì)蛋白M1的表達情況,從而分析CHO-K1細胞內(nèi)流感病毒的復制情況和感染情況。
8.人流感病毒蛋白合成檢測:CHO-K1細胞感染后,收取細胞,提取總蛋白,利用免疫印跡的方法檢測感染后的CHO-K1細胞內(nèi)流感病毒核蛋白NP的相對表達量。
結果:
植物凝集素特異性染色結果顯
6、示,CHO-K1細胞與植物凝集素MAAI和MAAII孵育后,細胞膜表面呈陽性信號,表明CHO-K1細胞膜上存在α-2,3唾液酸受體。但與植物凝集素SNA共孵育后,則呈陰性信號,表明CHO-K1細胞不存在人流感α-2,6唾液酸受體。
利用RT-PCR檢測siRNA下調(diào)效率,與對照組相比,siRNA干擾過后的CHO-K1細胞內(nèi)SNX5基因表達量減少約70%。通過流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn),SNX5下調(diào)后的CHO-K1細胞通過巨胞飲吞噬的右
7、旋糖酐含量下降,說明其吞噬能力減弱。利用人流感病毒感染SNX5下調(diào)后的CHO-K1細胞,再用RT-PCR和免疫印跡檢測病毒基質(zhì)蛋白基因表達量及流感病毒核蛋白,顯示其表達量與對照組有顯著差異。
結論:
1.CHO-K1細胞膜僅僅存在禽流感病毒α-2,3唾液酸受體,沒有人流感病毒α-2,6唾液酸受體;
2.人流感病毒H1N1可以感染缺乏α-2,6唾液酸受體的CHO-K1細胞,并可在細胞內(nèi)復制;
3.S
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 重配制備H1N1流感病毒Vero細胞適應株.pdf
- 2009甲型H1N1流感病毒與普通季節(jié)性流感病毒感染細胞效率的比較.pdf
- 甲型h1n1流感病毒院內(nèi)感染預防與控制ppt課件
- 大流行H1N1和季節(jié)性H1N1流感病毒的重配研究.pdf
- 甲型h1n1流感病毒室檢測技術方案
- 甲型H1N1流感病毒致病機理的研究.pdf
- 甲型流感病毒檢測方法及技術方案h1n1
- 甲型流感病毒(H1N1)感染介導的小鼠免疫損傷機制研究.pdf
- 重配H1N1亞型流感病毒減毒疫苗株的研究.pdf
- 古典H1N1亞型豬流感病毒PB2 K627E突變對病毒復制能力的影響.pdf
- 甲型H1N1流感病毒致宿主細胞氧化損傷機制的研究.pdf
- 流感病毒(H5N1)Vero細胞適應株制備.pdf
- H1N1亞型流感病毒八質(zhì)粒體系的冷適應拯救.pdf
- 防范h1n1新型流感校園群聚感染
- 甲型H1N1流感病毒引起機體免疫反應的分析.pdf
- 甲型H1N1流感病毒HA上糖基化位點及H1N2豬流感病毒致病性研究.pdf
- 甲型H1N1流感病毒重要抗原HA1、NAe蛋白的表達及應用.pdf
- 利用原位雜交技術研究H1N1流感病毒對心臟發(fā)育基因的影響.pdf
- 梔子苷對甲型H1N1流感病毒抑制效應的實驗研究.pdf
- 甲型H1N1流感病毒的主體建模防控仿真研究.pdf
評論
0/150
提交評論