2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  Telocytes(TCs)是一種普遍存在于人類(lèi)和嚙齒類(lèi)動(dòng)物器官和組織中的特殊間質(zhì)細(xì)胞。近年來(lái)逐漸深入研究的結(jié)果顯示,TCs可能通過(guò)細(xì)胞間連接來(lái)調(diào)節(jié)局部的免疫微環(huán)境。婦科疾病,諸如子宮內(nèi)膜異位癥、不孕癥,均與免疫有密切關(guān)系,而 TCs潛在的免疫調(diào)節(jié)作用,在婦科疾病中尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究體外條件下,間接共培養(yǎng)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(pMACs)在子宮 TCs的刺激下產(chǎn)生的形態(tài),活力以及分泌功能的變化,旨在了解子宮TCs在局

2、部免疫環(huán)境調(diào)節(jié)中起到的作用以及潛在影響。
  方法:
  選取SPF級(jí)BALB/c小鼠用作TCs原代細(xì)胞培養(yǎng)和腹腔巨噬細(xì)胞的分離提取。1.過(guò)量麻醉處死小鼠,無(wú)菌條件下取小鼠子宮組織,用酶消化的方法提取TCs進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)。
  2.采用亞甲藍(lán)染色,活細(xì)胞線粒體染色和免疫熒光染色(vimentin,CD34及c-kit)等方法鑒定并觀察TCs細(xì)胞形態(tài)。
  3.顯微鏡下動(dòng)態(tài)觀察并拍攝照片,記錄TCs細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)及T

3、ps(TCs細(xì)胞特有的極細(xì)長(zhǎng)串珠狀突起)的形態(tài)變化。
  4.流式細(xì)胞方法標(biāo)記(vimentin及CD34)檢測(cè)培養(yǎng)TCs細(xì)胞純度。
  5.TCs傳代并生長(zhǎng)穩(wěn)定后,加入不含血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,培養(yǎng)24 h,收集細(xì)胞上清,即Telocytes條件培養(yǎng)基(TCM)。
  6.無(wú)菌條件下,向小鼠腹腔內(nèi)注射巰基乙醇酸鹽,刺激腹腔巨噬細(xì)胞的產(chǎn)生。三天后用腹腔沖洗的方法提取小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(pMACs)。
  7.用TCM培

4、養(yǎng)pMACs作為實(shí)驗(yàn)組,空白培養(yǎng)基培養(yǎng)pMACs作為陰性對(duì)照組,空白培養(yǎng)基加脂多糖(LPS)培養(yǎng)pMACs作為陽(yáng)性對(duì)照組,建立間接共培養(yǎng)模型。
  8.觀察48 h后巨噬細(xì)胞形態(tài),用CCK-8法測(cè)定巨噬細(xì)胞活性。巨噬細(xì)胞線粒體熒光染色,拍照記錄并分析熒光強(qiáng)度。分別收集24 h及48 h培養(yǎng)細(xì)胞上清液,用Elisa法檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞因子水平(iNOS,IL-6,TNF-α,IL1-R1,IL-10,TGF-β1,IL-1β,IL-23α

5、及 IL-18)。探討pMACs受到TCs間接刺激后形態(tài),活力及分泌功能的變化。
  結(jié)果:
  1.顯微鏡下小鼠子宮TCs具有典型的形態(tài)特點(diǎn),胞體較小,但具有極為細(xì)長(zhǎng)的胞質(zhì)突起(Tps),并且粗細(xì)交替。亞甲藍(lán)染色下能更清楚地觀察細(xì)胞核和Tps形態(tài)。
  2.熒光顯微鏡下觀察,TCs呈vimentin陽(yáng)性,CD34陽(yáng)性和c-kit陰性表達(dá)。
  3.動(dòng)態(tài)拍攝記錄可觀察到TCs細(xì)胞胞體明顯的移動(dòng)和變化,胞體遷移過(guò)程

6、中Tps逐漸延長(zhǎng)。
  4.流式細(xì)胞方法檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞,vimentin和CD34雙陽(yáng)性細(xì)胞占90%以上。
  5.TCM培養(yǎng) pMACs后,pMACs發(fā)生了明顯的形態(tài)改變,細(xì)胞伸出偽足,胞膜粗糙,胞漿內(nèi)充滿(mǎn)顆粒感,但未發(fā)生皺縮和死亡,細(xì)胞間隙被變形的細(xì)胞偽足填滿(mǎn)。而陰性對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)變化不明顯,LPS刺激組細(xì)胞在 LPS作用下已開(kāi)始發(fā)生細(xì)胞皺縮和死亡,細(xì)胞間隙明顯增大。
  6.CCK-8法測(cè)定細(xì)胞活性后,實(shí)驗(yàn)組較陰性

7、對(duì)照組活性明顯升高(p<0.05),相較LPS刺激組無(wú)明顯差別(p>0.05)。
  7.巨噬細(xì)胞線粒體熒光染色,使用熒光顯微鏡附帶軟件分析熒光強(qiáng)度。陰性對(duì)照組9732.27?1996.87;陽(yáng)性對(duì)照組:21939.16?2159.58;TCM培養(yǎng)組:29478.73?3652.01,相較于陰性對(duì)照組及陽(yáng)性對(duì)照組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。
  8.細(xì)胞因子定量測(cè)定:在受到 TCs間接刺激的 pMACs培養(yǎng)上清液中,iN

8、OS和IL-6在24和48小時(shí)都有顯著增高(p<0.05)。TNF-α,IL1-R1和IL-10,雖然升高不顯著,但48小時(shí)數(shù)據(jù)仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。TGF-β1,IL-1β,IL-23α和IL-18的數(shù)據(jù)結(jié)果在三組中無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)
  結(jié)論:
  原代培養(yǎng)的子宮TCs在間接共培養(yǎng)條件下對(duì)pMACs產(chǎn)生了明顯的活化作用,使pMACs的形態(tài)發(fā)生了明顯的改變,細(xì)胞活力有明顯的提高,分泌的部分免疫相關(guān)細(xì)胞因

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