共軛亞油酸異構(gòu)體及異油酸對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的促凋亡作用及機(jī)理研究.pdf

1、共軛亞油酸（Conjugated linoleic acid，CLA）是一種功能性油脂，是食物中的天然成分，對人體無毒副作用，主要存在于牛、羊等瘤胃動(dòng)物的乳脂及肉制品中。近年來大量動(dòng)物試驗(yàn)表明CLA具有抗癌、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降低脂肪沉積等重要生理功能。異油酸（Vaccenic acid，VA，t11-C18:1）是一種天然反式脂肪酸，目前關(guān)于反式脂肪酸與癌癥的關(guān)系還尚不明確，需進(jìn)一步深入研究。本文應(yīng)用人乳腺癌MCF-7細(xì)胞為體外模型，用

2、MTT法、熒光染色及流式細(xì)胞術(shù)比較了3種CLA異構(gòu)體（c9,t11-CLA，t10,c12-CLA，t9,t11-CLA）及2種反式脂肪酸（反油酸、異油酸）對乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞生長、凋亡及細(xì)胞周期的影響，以篩選出更有效抗癌的CLA異構(gòu)體，并探討反油酸、異油酸對MCF-7細(xì)胞的影響。另外，運(yùn)用RT-PCR和Western-blot方法研究3種CLA單體激活PPARγ的能力和PPARγ調(diào)控凋亡相關(guān)基因和蛋白表達(dá)之間的相互關(guān)系，從基因和

3、蛋白水平闡明CLA單體及異油酸誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7凋亡的可能機(jī)制，為盡早將這一天然產(chǎn)物應(yīng)用于乳腺癌的防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　3種CLA異構(gòu)體及反式脂肪酸VA作用MCF-7細(xì)胞48 h后，均可抑制MCF-7細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，且抑制作用呈劑量依賴性，但CLA的抑制作用顯著強(qiáng)于VA。在濃度≤50μmol/L時(shí)，t10,c12-CLA的抑制作用強(qiáng)于c9,t11-CLA，而≥100μmol/L時(shí)，c9,t11-CL

4、A的抑制作用強(qiáng)于t10,c12-CLA。t9,t11-CLA單體在濃度為50μmol/L時(shí)對MCF-7細(xì)胞的增殖抑制率就達(dá)到了34.01％，它在抑制MCF-7細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡方面是最有效的CLA單體。EA作用MCF-7細(xì)胞48 h后，則表現(xiàn)出在一定劑量范圍內(nèi)促進(jìn)MCF-7細(xì)胞增殖。與對照組相比，各CLA單體及VA組隨著作用濃度的增加，MCF-7細(xì)胞G0/G1期縮短，S期延長，顯然，CLA及VA可將細(xì)胞阻滯在S期，阻滯了DNA合成，

5、不能繼續(xù)完成下面的細(xì)胞周期活動(dòng)，從而抑制細(xì)胞增殖。由此可以推測CLA及VA可能通過影響細(xì)胞周期進(jìn)程從而抑制細(xì)胞分裂增殖并誘導(dǎo)凋亡。
　　不同CLA異構(gòu)體能促進(jìn)MCF-7細(xì)胞中PPARγ基因及其蛋白的表達(dá)，而且PPARγ的變化與促凋亡基因bcl-xS的變化趨勢相一致。反式脂肪酸VA也能促進(jìn)促凋亡基因bcl-xS mRNA及蛋白Bax的表達(dá)。100μmol/L c9,t11-CLA，50μmol/L t10,c12-CLA，50和10

6、0μmol/L t9,t11-CLA組的抑凋亡基因bcl-xL mRNA及其蛋白Bcl-2表達(dá)均下降，其中t9,t11-CLA組，抑凋亡基因bcl-xL mRNA及其蛋白表達(dá)水平明顯降低。從bcl-xS與bcl-xL mRNA及其蛋白Bax與Bcl-2的表達(dá)比例可知， VA和 c9,t11-CLA在100μmol/L時(shí)表達(dá)最高，而 t10,c12-CLA和t9,t11-CLA則在50μmol/L時(shí)表達(dá)最高。結(jié)果表明VA和3種CLA異構(gòu)體