肝細(xì)胞死亡在慢性乙型肝炎病毒感染重癥化演變中的意義及機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討肝細(xì)胞死亡水平在慢性乙型病毒性肝炎（Hepatitis B virus，HBV）感染重癥化演變中的臨床意義并探索肝細(xì)胞程序性壞死在乙肝相關(guān)肝衰竭中的作用。
　　方法：利用肝細(xì)胞死亡血清標(biāo)志物，M30（肝細(xì)胞凋亡）及M65（總體死亡）對(duì)不同疾病階段的慢性HBV感染人群（n=405）做肝細(xì)胞死亡水平分析并以250例健康人群作正常對(duì)照。針對(duì)其中201例接受肝穿刺檢查的慢性HBV感染未經(jīng)抗病毒治療的亞組患者分析肝細(xì)胞死亡水平與肝

2、內(nèi)炎癥、纖維化之間的關(guān)系。探討 HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭（Acute-on-chronic liver failure，ACLF）亞組患者（n=54）分析肝細(xì)胞死亡水平與 HBV-ACLF預(yù)后轉(zhuǎn)歸之間的關(guān)系。進(jìn)一步利用臨床肝衰竭患者以及肝衰竭小鼠模型（LPS/D-GalN），明確肝細(xì)胞壞死亞型-程序性壞死是否參與疾病進(jìn)展，并結(jié)合抑制劑以及基因編輯方法嘗試探索程序性壞死在肝衰竭中的作用。
　　結(jié)果：慢性HBV感染患者血清M30抗原及

3、M65抗原顯著（P均<0.001）高于健康人群。斯皮爾曼相關(guān)性分析結(jié)果示M30及M65抗原均與谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素、肝硬度、APRI評(píng)分、FIB-4評(píng)分、HBV-DNA、凝血酶原時(shí)間、國(guó)際化標(biāo)準(zhǔn)比值（INR）、CTPs及MELD評(píng)分等呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性（P<0.001）。血清M30及M65水平在HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭患者顯著高于單純肝硬化失代償患者、肝硬化代償期以及非肝硬化患者。進(jìn)一步對(duì)未曾接受抗病毒治療并在我院進(jìn)行肝臟穿刺

4、術(shù)的患者（n=201）做亞組分析。結(jié)果顯示肝組織存在顯著病變（顯著性炎癥壞死和/或顯著性纖維化，significant histological lesions，SHL）的慢性HBV感染患者較非SHL患者血清M30及M65水平顯著升高。另一方面，在HBV-ACLF亞組的分析預(yù)后分析中，3個(gè)月死亡的HBV-ACLF患者組的基線血清M30和M65水平顯著（P<0.001）高于存活患者組。兩者在區(qū)分HBV-ACLF患者住院3個(gè)月后存活或死亡的

5、AUCs分別為0.86及0.83。選取M30>750 U/L及M65>5000 U/L作為閾值進(jìn)一步分析得，基線M30>750 U/L的HBV-ACLF患者，較基線M30≤750 U/L患者預(yù)后明顯更差(Cumulative death ratio,30 day:71.4％vs.11.6%,90 day:89.3%vs.26.9%，P<0.001)。相似地，基線M65>5000的HBV-ACLF患者，較基線M65≤5000 U/L患者預(yù)

6、后明顯更差(Cumulative death ratio,30 day:78.6% vs.7.7%,90 day:85.7% vs.26.9%，P<0.001)。在校正了潛在的影響因素后，基線高水平肝細(xì)胞死亡與HBV-ACLF患者預(yù)后不佳獨(dú)立相關(guān)?；趩?、多因素Cox回歸構(gòu)建的MELD-CD模型，在經(jīng)重抽樣校正后，Harrell’s C-index為0.86，顯著優(yōu)于MELD、MELD-NA及CTPs評(píng)分。動(dòng)態(tài)分析結(jié)果顯示預(yù)后不佳的HB

7、V-ACLF患者基線高水平的肝細(xì)胞壞死繼續(xù)持續(xù)升高。進(jìn)一步，我們?cè)贖BV-ACLF患者中均發(fā)現(xiàn)了肝細(xì)胞壞死亞型，程序性壞死參與肝衰竭疾病進(jìn)展，并在肝衰竭動(dòng)物模型得到了驗(yàn)證。利用腺病毒感染技術(shù)在體過(guò)表達(dá)程序性壞死關(guān)鍵執(zhí)行分子MLKL能夠加重肝衰竭小鼠肝損傷程度，加速肝衰竭小鼠死亡。而利用NEC-1抑制程序性壞死關(guān)鍵上游調(diào)控分子RIPK1則能夠顯著降低肝衰竭小鼠死亡率。
　　結(jié)論：慢性HBV感染患者升高的肝細(xì)胞死亡水平與肝內(nèi)炎癥、纖維