2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、燕麥向光素的LOV(Light,Oxygen,Voltage)結(jié)構(gòu)域包含LOV1和LOV2兩個(gè)亞基。其中LOV2結(jié)構(gòu)域作為熒光蛋白,相比于綠色熒光蛋白(green fluorescentprotein,GFP),具有自身獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn):1、LOV2結(jié)構(gòu)域蛋白是可溶性的;2、它的相對(duì)分子質(zhì)量小,大約只有100-140個(gè)氨基酸殘基;3、它的光吸收輔助因子-黃素單核甘酸(flavin mononucleotide,F(xiàn)MN)幾乎存在于所有類型的細(xì)胞

2、中;4、相同條件下,其熒光強(qiáng)度顯著強(qiáng)于綠色熒光蛋白。正是由于這些優(yōu)點(diǎn)使其成為了光遺傳學(xué)研究的理想工具,廣泛地被應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)的研究中。
  本論文主要包括以下三個(gè)部分的工作:
  1.本研究根據(jù)Genebank中的燕麥向光素基因序列,人工合成了LOV2結(jié)構(gòu)域編碼的基因片段:AsLOV2(404-560);并構(gòu)建C450A突變基因,AsLOV2(404-560,C450A);進(jìn)一步缺失C末端的Jα肽段,得到AsLOV2(

3、404-521,C450A)。這三個(gè)基因片段被克隆于表達(dá)載體pGEX-6p-1,利用親和層析的方法,純化得到與gst標(biāo)簽融合的目標(biāo)蛋白。結(jié)果表明三種純化蛋白具有與參考文獻(xiàn)一致的吸收光譜,且三種蛋白均可與FMN結(jié)合,并表現(xiàn)出光活性。在熒光強(qiáng)度方面,突變蛋白的熒光強(qiáng)度大約是野生型的6倍,突變截短型蛋白的熒光強(qiáng)度大約是野生型的7倍。在此前提下,本研究還構(gòu)建表達(dá)了AsLOV2(404-521,C450A)與細(xì)胞色素b562(cytochrome

4、 b562, cytb562)的融合蛋白,即cytb562-3c-AsLOV2(404-521,C450A)和AsLOV2(404-521,C450A)-3c-cytb562。3c蛋白酶(PreScission protease)具有特異性識(shí)別融合蛋白連接肽段的作用,用其對(duì)融合蛋白進(jìn)行酶切。結(jié)果表明:聚丙烯酰胺凝膠電泳圖顯示融合蛋白被3c蛋白酶切割開,但是融合蛋白的熒光強(qiáng)度并未如預(yù)期的那樣顯著增強(qiáng)。
  2.本研究還將野生型AsL

5、OV2結(jié)構(gòu)域中半胱氨酸周圍的一些氨基酸均突變?yōu)榘腚装彼幔?gòu)建了N449C、R451C、Q446C、I428C、F429C、A430C等突變。在有Hg2+存在的條件下,野生型AsLOV2中的半胱氨酸巰基與Hg2+結(jié)合而不與FMN發(fā)生加成反應(yīng),從而使熒光增強(qiáng),實(shí)現(xiàn)對(duì)Hg2+的熒光檢測(cè)。結(jié)果表明:這些突變蛋白和野生型一樣,均未實(shí)現(xiàn)對(duì)Hg2+有明顯熒光增強(qiáng)的響應(yīng)效應(yīng),其中F429C突變蛋白加入Hg2+后,熒光強(qiáng)度略有升高。
  3.本論

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