2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩52頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、中腦星形膠質(zhì)細(xì)胞來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子( Mesencephalic Astrocyte-derived Neurotrophic Factor, MANF),是一種分泌蛋白,約20KD,最初從體外培養(yǎng)的大鼠中腦Ⅰ型星形膠質(zhì)細(xì)胞株中分離出來。它和保守型多巴胺能神經(jīng)營養(yǎng)因子(Conserved Dopamine Neurotrophic Factor, CDNF)同屬于新生的神經(jīng)營養(yǎng)因子保守家族。最近研究發(fā)現(xiàn),體內(nèi)或體外培養(yǎng)的神經(jīng)元受到損傷刺

2、激時MANF的表達(dá)會升高。然而MANF在不同類型膠質(zhì)細(xì)胞,尤其是星形膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)模式尚未明了。為了深入研究這個問題,檢測了正常大鼠和腦缺血大鼠神經(jīng)元MANF的表達(dá)量。令人驚訝的是,發(fā)現(xiàn)正常大鼠的大腦皮層中,MANF主要由神經(jīng)元分泌,星形膠質(zhì)細(xì)胞僅在嚴(yán)重缺血時表達(dá)MANF,這與它的名稱不符合。然而,在體外培養(yǎng)的原代神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,包括星形膠質(zhì)細(xì)胞中可見MANF表達(dá),使用ER應(yīng)激的刺激或營養(yǎng)被剝奪可使MANF表達(dá)上調(diào)。另外,最有趣的是小膠

3、質(zhì)細(xì)胞MANF的表達(dá)模式,皮層和海馬散在的活化的小膠質(zhì)細(xì)胞可表達(dá)MANF,但輕度缺血導(dǎo)致的小膠質(zhì)細(xì)胞聚集時MANF無明顯表達(dá)。這些結(jié)果表明,MANF的表達(dá)是可誘導(dǎo)的,且在不同類型的膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)具有差異性,腦組織中神經(jīng)元是MANF的主要來源。
  目的:
  觀察MANF在中樞神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)情況。
  方法:
  線栓法制作SD大鼠大腦中動脈缺血再灌注模型,分別缺血2小時和4小時,再灌注24小時后處死大鼠

4、。原代培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞取自孕16-18天SD大鼠胚胎,皮層和海馬分開研磨、離心、計數(shù)后重懸培養(yǎng)于含血清的DMEM數(shù)天,之后分別用低血清、MG132和衣霉素處理。RT-PCR方法檢測ER應(yīng)激相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平,Western Blotting和免疫熒光檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)水平及細(xì)胞內(nèi)分布。用PI染色法鑒別死細(xì)胞。
  結(jié)果:
  1.星形膠質(zhì)細(xì)胞中MANF的表達(dá)
  用熒光雙標(biāo)法檢測大鼠腦組織星形膠質(zhì)細(xì)胞中MANF的表達(dá), G

5、FAP和NeuN分別是星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的標(biāo)志蛋白。在正常大鼠大腦皮層,MANF主要在NeuN陽性細(xì)胞表達(dá),而星形膠質(zhì)細(xì)胞中不表達(dá)。輕度腦缺血時,GFAP陰性細(xì)胞中MANF表達(dá)上調(diào)。然而重度腦缺血可誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)MANF。5%血清培養(yǎng)的正常星形膠質(zhì)細(xì)胞中MANF幾乎不表達(dá)。然而ER應(yīng)激時,包括衣霉素、MG132和無血清培養(yǎng),MANF可被誘導(dǎo)表達(dá)。通過RT-PCR和Western Blotting檢測MANF的蛋白和mRNA水平,

6、結(jié)果表明腦組織中神經(jīng)元是MANF的主要來源,星形膠質(zhì)細(xì)胞在ER應(yīng)激刺激下可表達(dá)MANF。
  2.小膠質(zhì)細(xì)胞中MANF的表達(dá)
  為了觀察小膠質(zhì)細(xì)胞中MANF的表達(dá)情況,用小膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白CD68的單抗和MANF的單抗進(jìn)行免疫熒光雙標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在正常腦組織中有少量CD68陽性的細(xì)胞中有MANF表達(dá),而正常的星形膠質(zhì)細(xì)胞中沒有檢測到MANF的表達(dá)。另外MANF的表達(dá)與小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)有關(guān),例如桿狀或靜止?fàn)顟B(tài)的網(wǎng)狀小膠質(zhì)

7、細(xì)胞不表達(dá)MANF,阿米巴樣或圓形的小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)MANF。在缺血的腦組織中,散在的小膠質(zhì)細(xì)胞中MANF免疫反應(yīng)陽性;而皮層和海馬中聚集的小膠質(zhì)細(xì)胞中無MANF表達(dá)。這些結(jié)果表明:MANF在小膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)不僅依賴于其形態(tài),而且與小膠質(zhì)細(xì)胞的狀態(tài)有關(guān)。在體外培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞中也檢測到MANF的表達(dá)。5%血清培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞呈桿狀或網(wǎng)狀,幾乎不表達(dá)MANF。衣霉素處理24小時后,小膠質(zhì)細(xì)胞變成阿米巴樣或圓形,此時小膠質(zhì)細(xì)胞中MANF表達(dá)

8、上調(diào)。
  3. MANF在少突膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)
  在正常大腦皮層中的少突膠質(zhì)細(xì)胞呈現(xiàn)分枝狀,且胞體很小,CNP分布在放射狀的樹突和軸突。腦缺血時MANF在胞體表達(dá),而樹突和軸突表達(dá)減少。DAPI雙標(biāo)檢測到細(xì)胞核中有少量的MANF。與星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞相同的是衣霉素處理后少突膠質(zhì)細(xì)胞中MANF表達(dá)上調(diào)。這個結(jié)果表明腦缺血和ER應(yīng)激均可誘導(dǎo)少突膠質(zhì)細(xì)胞中MANF的表達(dá)。
  4.原代培養(yǎng)的膠質(zhì)細(xì)胞中MANF的表達(dá)

9、
  Bip和CHOP是ER應(yīng)激的標(biāo)志物。用衣霉素、MG132和營養(yǎng)剝奪均可誘導(dǎo)原代培養(yǎng)的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)MANF。Bip和CHOP的mRNA和蛋白均被上調(diào),而無血清培養(yǎng)對CHOP蛋白水平作用較小。該結(jié)果提示,膠質(zhì)細(xì)胞可被誘導(dǎo)出現(xiàn)ER應(yīng)激及MANF表達(dá)。同時,PI染色和DAPI染色結(jié)果顯示,衣霉素、MG132處理和無血清培養(yǎng)可引起PI陽性細(xì)胞增加,提示ER應(yīng)激可誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。
  結(jié)論:
  以上研究結(jié)果表明,在腦組織

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論