宮頸癌中miRNAs差異性表達(dá)的實驗研究.pdf

1、目的：
　　探究宮頸癌患者血清及組織標(biāo)本中miRNAs的表達(dá)情況，尋找差異性表達(dá)的miRNA，以期為宮頸癌的早期診斷和靶向治療提供新的生物標(biāo)記物。
　　方法：
　　(1)收集臨床宮頸癌首診患者和健康體檢者的血清；
　　(2)收集臨床宮頸癌患者術(shù)后腫瘤標(biāo)本和行宮頸錐切術(shù)宮頸炎患者的宮頸組織；
　　(3)PCR對患者及對照組的高危型HPV感染情況進(jìn)行分型檢測；
　　(4)用miRNA array技術(shù)篩查宮

2、頸癌患者血清中miRNA的表達(dá)譜；
　　(5)實時定量PCR檢測各樣本中miRNA的表達(dá)水平；
　　(6)Targetscan預(yù)測差異性表達(dá)miRNA的靶基因；
　　(7)實時定量PCR、免疫組化技術(shù)檢測宮頸癌組織中靶基因的表達(dá)水平；
　　(8)統(tǒng)計學(xué)分析血清樣本及組織標(biāo)本中miRNA和靶基因的表達(dá)差異。
　　結(jié)果：
　　(1)miRNA array顯示在宮頸癌患者血清中miR-34a、miR-27a

3、、miR-221、miR-203、miR-205、miR-15b、miR-25、miR-222、miR-21、miR-200b及 miR-16較正常對照組有差異；
　　(2)qRT-PCR顯示在宮頸癌患者血清中miR-34a呈低表達(dá)(P<0.05)，miR-21、miR-200b及miR-221呈高表達(dá)(P<0.05)；
　　(3)Targetscan預(yù)測miR-21、miR-200b和miR-221三個高表達(dá)的miRNAs

4、的共同靶基因有AGO2、FOXN2、FOXP1、PKIA、PPP6C、CNOT6、TRPM3和BCL11B等8個，低表達(dá)的miR-34a的有PD-L1、HMGB1、c-Met和Bcl-2等；
　　(4)在宮頸癌組織中 miR-21(P<0.05)、miR-200b(P<0.01)及miR-221(P<0.05)呈高表達(dá)，miR-34a(P<0.05)呈低表達(dá)。miR-21、miR-200b和miR-221三個高表達(dá)的miRNAs的

5、共同靶基因中有AGO2表達(dá)升高(P<0.01)、FOXP1和CNOT6表達(dá)降低(P<0.05)，而miR-34a的靶基因PD-L1、HMGB1和c-Met的表達(dá)均升高(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　(1)U6在宮頸癌血清及組織中表達(dá)穩(wěn)定，可以作為宮頸癌相關(guān)miRNA研究中的內(nèi)參基因；
　　(2)miR-21、miR-34a、miR-200b和miR-221在宮頸癌血清及組織中均為差異性表達(dá)，且在組織和血清中的表達(dá)一