蒲葵子抗氧化及保肝活性研究.pdf

1、肝臟是生物體內(nèi)最大的腺體，具有分泌、生物轉(zhuǎn)化等多種生理功能，但損傷因素如病毒、藥物、酒精等可導(dǎo)致其功能障礙，引起肝組織變性、壞死。長(zhǎng)期處于肝損傷而缺乏有效的治療，往往容易病情惡化，甚至導(dǎo)致肝硬化、肝癌。目前臨床上常用的西藥甘草酸二銨、聯(lián)苯雙酯、還原型谷胱甘肽等，雖有一定作用，但遠(yuǎn)期療效不穩(wěn)定，部分藥品價(jià)格不菲，不良反應(yīng)漸有報(bào)道，限制了臨床應(yīng)用，故中醫(yī)藥防治肝損傷具有重要的臨床意義，也越來越受到重視。
　　中藥蒲葵子為廣東省常見植物

2、棕櫚科蒲葵樹(Livistona chinensis R.Br.)的種子，在廣東、廣西、福建和臺(tái)灣等地民間應(yīng)用廣泛，用于治療肝癌和肝炎。文獻(xiàn)報(bào)道蒲葵子的水提物、乙醇提取物和乙酸乙酯提取物均有一定的抗癌活性，能夠抑制人肝癌細(xì)胞株（HepG2和BEL-7402）等多種癌細(xì)胞增殖;蒲葵子的黃酮類化合物以及酚類成分具有抗氧化活性。眾所周知，活性氧(ROS)累積能導(dǎo)致肝臟損傷，因此，蒲葵子可能具有一定的抗氧化和保肝活性。
　　目的:

3、　　通過體內(nèi)與體外實(shí)驗(yàn)，研究蒲葵子不同極性部位的抗氧化和保肝作用，探究其可能的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.通過清除DPPH-自由基和超氧陰離子自由基（O2-）實(shí)驗(yàn)考察蒲葵子乙醇提取物中最佳抗氧化活性部位。
　　2.MTT法測(cè)定不同濃度蒲葵子乙酸乙酯部位(ethyl acetate fraction separatedfrom the fruit of Livistona chinensis，EFLC)對(duì)人正常肝細(xì)胞

4、LO2的細(xì)胞毒性;MTT法聯(lián)合流式細(xì)胞儀和細(xì)胞核染色劑Hoechst3342考察EFLC對(duì)H2O2誘導(dǎo)的LO2細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用;試劑盒法檢測(cè)細(xì)胞中丙二醛(MDA)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)含量。
　　3.BABL/C小鼠連續(xù)灌胃一周EFLC預(yù)防給藥7天后尾靜脈注射ConA誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型，測(cè)定小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)含量和肝臟組織勻漿中MDA、T

5、-SOD以及GSH-PX含量，H&E染色觀察小鼠肝臟的組織學(xué)變化，探究EFLC對(duì)急性肝損傷的保護(hù)作用;WesternBlot法檢測(cè)小鼠肝臟組織的Caspase-3，Caspase-8，Bax，Bcl-2，F(xiàn)as和Fasl蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　清除DPPH-自由基和超氧陰離子自由基(O2-)體外實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示EFLC抗氧化能力最佳;對(duì)于H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷，EFLC預(yù)防給藥能夠減少LO2細(xì)胞凋亡，升高抗氧化

6、酶表達(dá)水平;對(duì)于ConA誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷，EFLC預(yù)防給藥（連續(xù)灌胃一周）能夠顯著降小鼠血清的ALT和AST水平，升高肝臟勻漿中的GSH-PX和T-SOD表達(dá)水平，降低MDA值，減輕ConA引起的小鼠的肝臟組織學(xué)傷害;實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示EFLC具有保肝和抗氧化作用，其機(jī)理可能與EFLC能夠下調(diào)ConA引起的肝損傷的小鼠肝臟組織中的Bax、Caspase-3、Caspase-8、Fas和FasL蛋白表達(dá)水平，上調(diào)小鼠肝臟組織中的Bcl-2蛋白

7、表達(dá)水平有關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.在蒲葵子不同極性提取物中，EFLC抗氧化活性最佳。
　　2.EFLC對(duì)H2O2誘導(dǎo)的LO2細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷具有保護(hù)作用。
　　3.EFLC對(duì)ConA誘導(dǎo)的急性肝損傷具有保護(hù)保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抗氧化損傷和下調(diào)ConA引起的肝損傷的小鼠肝臟組織中的凋亡相關(guān)蛋白Bax、Caspase-3、Caspase-8、Fas和FasL蛋白表達(dá)水平，上調(diào)小鼠肝臟組織中的抗凋亡蛋白Bcl-2蛋