CUMS抑郁模型小鼠肝臟的iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、研究背景：
　　抑郁癥是一種高度流行且致殘的精神疾病，對人們的生活質(zhì)量和機(jī)體功能有重大損害。然而，我們對抑郁表型及其潛在的病理生理學(xué)機(jī)制之間的關(guān)系仍然知之甚少?，F(xiàn)階段對抑郁癥的研究主要集中在腦區(qū)，腦與機(jī)體的聯(lián)合探索可能會為抑郁癥病因的全面理解提供新的線索。作為人體最大的內(nèi)臟器官，肝臟在機(jī)體生物轉(zhuǎn)化，合成，代謝等一系列生理和生化反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用。但目前仍然沒有用蛋白質(zhì)組學(xué)方法對抑郁模型小鼠肝臟中蛋白表達(dá)進(jìn)行評估的相關(guān)研究。

2、r>　　目的：
　　本研究旨在用iTRAQ標(biāo)記和LC-MS/MS聯(lián)合的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定CUMS抑郁模型小鼠肝臟的蛋白表達(dá)譜，用特定的篩選條件尋找相關(guān)的差異蛋白，初步分析這些差異蛋白及其所涉及通路的病理生理機(jī)制，探討抑郁狀態(tài)下肝臟結(jié)構(gòu)功能改變與蛋白表達(dá)譜變化的關(guān)系，為診治抑郁癥提供新的思路和方向。
　　方法：
　　經(jīng)過環(huán)境適應(yīng)和一周的糖水訓(xùn)練之后，我們隨機(jī)地把40只正常的C57BL/6J雄性小鼠分為抑郁模型組和正常對照

3、組（20:20）。20只模型組小鼠進(jìn)行4周的慢性不可預(yù)知性溫和刺激之后，將兩組進(jìn)行行為學(xué)評估，若模型成立，從每組中隨機(jī)選取小鼠肝臟組織（10:10）進(jìn)行itraq蛋白組學(xué)鑒定，對差異蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析，另每組選取6只小鼠肝臟組織對差異蛋白和通路進(jìn)行免疫印跡法（Western blot，WB）驗(yàn)證。
　　結(jié)果：
　　1.模型組CUMS之后對兩組的體重，糖水偏好，強(qiáng)迫游泳，曠場試驗(yàn)等行為學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，有顯著差異，證明

4、造模成功。
　　2.Itraq串聯(lián)質(zhì)譜鑒定出4000多種蛋白質(zhì)，用特殊肽段大于等于2，1.2以上差異倍數(shù)，P值小于0.05三個條件，篩選出66種最顯著差異的蛋白質(zhì)，用于進(jìn)一步的生物信息學(xué)分析。
　　3.通過信號網(wǎng)絡(luò)分析（IPA），我們發(fā)現(xiàn)這66種差異蛋白與炎癥反應(yīng)，免疫調(diào)節(jié)，脂質(zhì)代謝和NFκB信號通路等病理生理過程相關(guān)。
　　4.此外，通過免疫印跡法（Western blot，WB）驗(yàn)證了與這些通路密切相關(guān)的四種蛋白質(zhì)