雷帕霉素和NVP-BEZ235單藥或聯(lián)合對CNE-2細胞增殖凋亡的作用及其機制研究.pdf

1、目的：
　　研究雷帕霉素、PI3K/mTOR雙重抑制劑NVP-BEZ235及兩者聯(lián)合對鼻咽癌細胞株CNE-2的生長、增殖、凋亡及PI3K/Akt/mTOR信號通路中主要靶點的影響，探討NVP-BEZ235聯(lián)合雷帕霉素對體外鼻咽癌細胞株CNE-2的作用及可能機制。
　　方法：
　　將鼻咽癌細胞株CNE-2進行體外培養(yǎng)，分為四組：1.NVP-BEZ235單藥組；2.雷帕霉素單藥組；3.NVP-BEZ235+雷帕霉素聯(lián)合組；

2、4.對照組。NVP-BEZ235單藥組設(shè)置為含濃度100nmol/L的NVP-BEZ235。雷帕霉素單藥組設(shè)置為含濃度100nmol/L的雷帕霉素。而NVP-BEZ235+雷帕霉素聯(lián)合組設(shè)置為混合終濃度100nmol/L的NVP-BEZ235和雷帕霉素。對照組設(shè)置為含濃度100nmol/L的藥物溶劑（不含受試藥物）。具體研究方法包括：1.光學(xué)顯微攝影下觀察上述作用后4組CNE-2細胞的形態(tài)學(xué)變化，拍照并記錄；2. MTT法檢測單藥及聯(lián)合

3、應(yīng)用對CNE-2細胞增殖能力的影響；3. RT-PCR及Western Blot檢測單藥及聯(lián)合應(yīng)用對CNE-2細胞PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白表達水平的影響；4.流式細胞術(shù)檢測單藥及聯(lián)合應(yīng)用對CNE-2細胞凋亡的影響。
　　結(jié)果：
　　1.經(jīng)雷帕霉素或NVP-BEZ235單藥組處理48h后的CNE-2細胞出現(xiàn)凋亡形態(tài)學(xué)改變。且NVP-BEZ235+雷帕霉素組與單藥組相比，CNE-2細胞表現(xiàn)出更明顯的細胞凋亡形態(tài)

4、學(xué)改變。2.藥物作用后3個處理組與對照組的CNE-2細胞增殖抑制率之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，但聯(lián)合組與單藥組的增殖抑制率之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。證明NVP-BEZ235、雷帕霉素單藥組及兩藥聯(lián)合組均能明顯抑制CNE-2細胞的增殖，但聯(lián)合用藥組較單獨用藥組CNE-2細胞增殖抑制效應(yīng)無明顯提高。3.（1）NVP-BEZ235單藥組降低CNE-2細胞PI3K和Akt mRNA及蛋白的表達水平；雷帕霉素單藥組對CN

5、E-2細胞PI3K和Akt mRNA及蛋白的表達水平無明顯影響；聯(lián)合應(yīng)用時，明顯降低CNE-2細胞PI3K和Akt mRNA及蛋白的表達水平，較NVP-BEZ23或雷帕霉素單藥組更為顯著，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。（2）雷帕霉素和NVP-BEZ235單藥組均顯著降低CNE-2細胞mTOR mRNA及蛋白的表達水平；而且兩藥聯(lián)合相比于單藥組，明顯降低CNE-2細胞mTOR mRNA及蛋白的表達水平，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.0

6、5)。4.兩單藥組分別與對照組相比，細胞凋亡率有所增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；聯(lián)合組與對照組相比，細胞凋亡率明顯增加，且差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；聯(lián)合組與兩單藥組相比，細胞凋亡率增加，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。證明聯(lián)合組對CNE-2細胞的誘導(dǎo)凋亡作用強于NVP-BEZ235單藥組或雷帕霉素單藥組。
　　結(jié)論：
　　1.雷帕霉素和NVP-BEZ235阻斷PI3K/Akt/mTOR信號通路，且